背景和目的：据中国卫生部统计：2006年，恶性肿瘤已成为中国城乡的首要死因。肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一，自20世纪90年代以来，HCC的发病率和死亡率已上升为我国恶性肿瘤的第2位，具有发展快，转移早，预后差等特点。目前，HCC治疗原则仍是以外科手术为主．的综合序贯治疗，但因其手术切除率低，术后转移及复发率较高，近、远期疗效并不令人满意，总的5年生存率不超过5％。因此，对于肝癌浸润和转移机制的深入研究，从分子水平找到可用于提示肝癌转移和预后判断的分子标志物，对于制定合理有效的综合治疗方案，提高患者的生存率，具有重要的理论指导意义和临床应用价值。对缺氧的耐受性和新生血管的形成是实体肿瘤发生、发展和转移过程中不可缺少的两个方面，缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor 1，HIF-1)是调节生理或病理状态下氧平衡的关键性转录调控因子。Heather等从免疫组织化学资料中可发现HIF-1α在肿瘤生物学中发挥重要作用，在良性肿瘤组织中，HIF-1α处于正常水平，在许多原发性恶性肿瘤中HIF-1α水平升高，而在转移性肿瘤，HIF-1α水平升高更加显著，HIF-1α的表达增高，可能是因为组织氧浓度降低。也可能是抑癌基因突变或癌基因激活，从而导致一系列基因的表达水平增高，使肿瘤细胞耐受缺氧，促进肿瘤生长、浸润转移。因此，HIF-1α的过表达可能在肿瘤发生、发展中发挥重要作用。缺氧的状态下，肿瘤细胞仍能不断增殖浸润，是由于肿瘤细胞可以采取两种方式来适应这种缺氧微环境。一种是Warburg效应，即肿瘤在缺氧，甚至有氧的情况下增加糖酵解酶的活性，从而加速糖酵解来获取能量；另一种是肿瘤血管生成，而血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor VEGF)在肿瘤血管形成调控方面起着重要作用。VEGF通过与VEGF受体结合，引起一系列的信号传导，释放各种生长因子与细胞因子，促进内皮细胞的增殖与迁移，最终引起血管增殖。目前的研究表明在乏氧时调节VEGF的信号传导途径中，HIF-1起中枢纽带作用，它不仅使VEGF的mRNA稳定性增加，而且能增加VEGF的转录活性。胰岛素样生长因子家族(IGFs)是一类具有促进细胞增殖、分化以及血管形成等多种生物活性的多肽生长因子，IGF-I是该家族重要成员。IGF-I作为强有力的促有丝分裂因子，可直接作用于细胞而诱导分裂增殖，而组织中细胞的过度分裂将大大增加肿瘤的发生几率。目前，已发现在许多人类肿瘤中存在HIF-1α、VEGF、IGF-I的异常表达，而有关联合检测三者在HCC中的表达及其与HCC分化、浸润、转移等生物学行为的关系的研究鲜有报道。本实验采用免疫组织化学SABC法检测HCC组织及正常肝组织石蜡切片中HIF-1α、VEGF、IGF-I的表达情况，同时分析这三项指标与HCC临床病理因素之间的关系，探讨其在HCC发生、发展过程中的作用，为HCC发生、浸润、转移的预测及预后判断提供参考依据。材料与方法：本实验所用的组织标本均取自郑州大学第一、二附属医院2004年2月至2006年6月手术切除且临床随访资料完整的54例HCC石蜡包埋组织标本。其中男性40例，女性14例。年龄29-78岁，平均年龄54.5岁。乙肝表面抗原(HBsAg)阳性者40例，占74.1％。血清甲胎蛋白(AFP≥400μg/l)阳性者35例。占64.9％。所有病例术前均未接受任何化疗，放疗、肝动脉栓塞及免疫治疗。按Edmonson病理学分级Ⅰ—Ⅱ级20例。Ⅲ-Ⅳ级34例。根据临床病理资料将标本分为高度侵袭转移组(31例)和低侵袭转移组(23例)，符合下列标准之一者判定为高度侵袭转移组：(1)门静脉有癌栓。(2)同一肝叶主癌灶周围大于2个或多个小卫星结节或伴有包膜受侵破坏。(3)肝门部淋巴结有转移。余归为低侵袭转移组。正常肝组织14例。取自肝血管瘤或肝囊肿周围的正常肝组织。患者无乙肝病史，HBsAg阴性。使用兔抗人HIF-1α抗体、兔抗人VEGF抗体、兔抗人IGF-I抗体行免疫组织化学SABC法染色，检测HCC组织及正常肝组织石蜡切片中HIF—1α、VEGF、IGF-I的表达情况，应用SPSS 14.0统计软件对实验数据进行统计学处理。计数资料采用x~2检验或秩和检验进行显著性检验。指标间的相关性采用Spearman等级相关分析。P＜0.05为有统计学意义。结果：(1)HIF-1α在HCC中阳性表达率为68.52％，正常肝组织中基本不表达。HCC组和正常肝组织之间HIF-1α的表达比较，差异具有显著性(P＜0.05)。(2)VEGF在HCC中阳性表达率为62.96％，正常肝组织中阳性表达率16.67％，HCC组织和正常肝组织之间VEGF的表达比较，差异具有显著性(P＜0.05)。(3)IGF-I在HCC中阳性表达率为72.22％，正常肝组织中阳性表达率35.71％，HCC组织和正常肝组织之间IGF-I的表达比较，差异具有显著性(P＜0.05)。(4)HCC组织中HIF-1α表达阳性、阴性者中，VEGF表达阳性率分别为86.49％、11.76％。HCC组织中HIF-1α蛋白与VEGF蛋白的表达呈正相关(rs=0.575，P＜0.05)。HCC组织中HIF-1α表达阳性、阴性者中，IGF-I表达阳性率分别为86.48％、41.18％。HCC组织中HIF-1α蛋白与IGF-I蛋白的表达呈正相关(rs=0.539，P＜0.05)。(5)HCC组织中HIF-1α蛋白的表达与患者术前AFP水平、肿瘤数目、Edmonson病理学分级无关(P＞0.05)。HIF-1α表达与肿瘤的侵袭转移能力，是否合并肝硬化密切相关(P＜0.05)。(6)在HCC组织中，VEGF的表达与与患者术前AFP水平、肿瘤数目、Edmonson病理学分级、是否合并肝硬化无关(P＞0.05)。而与肿瘤的侵袭转移能力密切相关，差异具有统计学意义(P＜0.05)。(7)在HCC组织中，IGF-I的表达与患者肿瘤数目、Edmonson病理学分级、是否合并肝硬化无关(P＞0.05)。而与患者术前AFP水平、肿瘤的侵袭转移能力密切相关，差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论：(1)HIF-1α、VEGF、IGF-I在HCC中表达上调，比较正常肝组织，差异具有显著意义，提示HIF-1α、VEGF、IGF-I可能参与了HCC的发生、发展。(2)HIF-1α、VEGF、IGF-I在HCC中的表达与肿瘤的侵袭转移能力密切相关，提示HIF-1α、VEGF、IGF-I可能参与了HCC的侵袭转移过程。(3)在HCC组织中HIF-1α、VEGF的表达呈显著的正相关，二者可能在HCC发展与转移过程中起协同作用。HCC组织中HIF-1α蛋白与IGF-I蛋白的表达呈正相关，说明了两者在诱导HCC肿瘤细胞的增殖中具有协同作用。(4)IGF-I蛋白可能通过激活以HIF-1α为中枢纽带的HIF通路参与了HCC的血管生成和发生发展过程。