【摘 要】
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5-氨基乙酰丙酸(ALA)是一种无公害绿色的除草剂、光动力杀虫剂、抗微生物药剂、植物生长促进剂。类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)生物合成ALA因简单、产率高,具有工业化潜力
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5-氨基乙酰丙酸(ALA)是一种无公害绿色的除草剂、光动力杀虫剂、抗微生物药剂、植物生长促进剂。类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)生物合成ALA因简单、产率高,具有工业化潜力,倍受国内外研究者及产业界的关注。本研究以产5-氨基乙酰丙酸的野生型类球红细菌为出发菌,以20 keV氩离子对出发菌进行诱变,选育高产5-氨基乙酰丙酸菌株,并对突变株的培养条件进行优化,在此基础上,通过PCR技术和生物信息学方法分析出发菌株和突变菌株的hemA基因在分子水平上的序列差异。获得以下主要研究结果:1.选用能量20 keY氩离子,注入剂量为0.26×1015ions/cm2~2.47×1015ions/cm2对出发菌进行诱变,通过存活率和突变率分析,经过三轮诱变筛选,获得一株高产5-氨基乙酰丙酸突变株RB,其注入剂量为1.30×1015ions/cm2。2.经多次传代实验,结果表明:该菌株遗传稳定性较好。突变株RB的5-氨基乙酰丙酸产量为9.23mg/L,较出发菌株的产量(3.78 mg/L)明显提高,是出发菌株的2.44倍。3.对突变株RB的培养条件进行优化,结果表明:类球红细菌突变株RB的最适培养条件为pH 7.0,接种量10%,光照强度3000 lux。在此条件下RB菌株的ALA产量最高。4.根据原始序列设计引物,从突变株RB中扩增出了hemA基因,并对其进行了序列分析,发现突变体hemA基因有36处碱基发生改变,导致7个氨基酸发生变化。碱基突变以转换为主,转换频率为69.4%,颠换频率为30.6%。突变株hemA基因碱基和氨基酸序列的变异可能是突变株活性提高的原因,这为进一步分析ALA高产突变的分子机制奠定了基础。
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