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第一部分SLE患者PBMC中的CEACAM1及相关分子m RNA水平表达与临床意义目的:研究癌胚抗原相关细胞黏附分子1(Carcinoembryonic antigen-related cellular adhesion molecule 1,CEACAM1)及相关基因在系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中m RNA水平的表达并分析其临床意义。方法:收集38例SLE患者和40例健康对照者的外周抗凝全血及SLE患者临床资料,SLE患者疾病活动度用根据SLEDAI(SLE Disease Activity Index)评分标准表得出的SLEDAI分值来代表。使用逆转录PCR和q RT-PCR的方法测出PBMC中的CEACAM1及TIM-3、PD-1、Galectin-9、IFNγ的m RNA表达水平,比较SLE患者与健康对照者之间以上五种分子的m RNA水平的表达差异及其与临床指标之间的相关性。结果:38例SLE患者的SLEDAI 5.89±6.25分,0分居多;SLE相对健康对照组而言PBMC中的CEACAM1、TIM-3、PD-1、Galectin-9、IFNγ的m RNA水平有差异,其中PD-1的相对表达量相对健康对照组而言降低,另外四个指标皆为升高,仅CEACAM1、Galectin-9的差异有统计学意义,P值分别为0.0109、0.0104;SLEDAI评分≥10分的SLE患者组相对健康对照组而言这五项m RNA水平相对表达量存在差异,都相对降低,仅TIM-3、PD-1方面的差异有统计学意义,P值分别为0.0264、0.0072;随着CEACAM1的m RNA相对表达水平的上升,ESR、Ig G、Ig A、Ig M的变化呈下降趋势,而CRP、C3、C4的变化呈上升趋势,仅ESR的下降趋势有统计学意义,P=0.0495。结论:CEACAM1在SLE患者PBMC中普遍表达上调,但是在SLEDAI高的患者中其下调,CEACAM1可能在SLE中参与负反馈调节机制,对SLE相关免疫细胞起到负向调节作用,对SLE起到保护作用。第二部分湖北汉族CEACAM1基因多态性与SLE相关性目的:研究CEACAM1基因的rs8102519、rs8103285、rs10402677这三个位点基因型、单体型与湖北汉族SLE人群的相关性,分析其临床意义。方法:收集177例SLE患者及210例健康对照者的外周抗凝全血及SLE患者的临床资料,应用测序的方法检测CEACAM1基因的rs8102519、rs8103285、rs10402677这三个位点的基因型,使用统计软件SPSS 23.0计算基因型与等位基因频率及其与SLE相关性,应用SHEsis进行单体型分析,联合分析三个位点的疾病风险。结果:rs8102519位点等位基因A在SLE患者组中的频率明显高于健康对照组(9.6%vs 5.7%,P=0.041),变体A(AA/GA)也可增加SLE的患病风险(OR=1.486,95%CI0.827-2.672),SLE患者中携带A等位基因(AA/GA)的频率虽然高于对照组(17.5%vs11.4%,P=0.088)但其差异无统计学意义,其基因型在SLE患者和健康对照组间分布的差异也无统计学意义(P=0.069);rs8103285位点(等位基因C,变体C(CC/CT),SLE患者中携带C等位基因(CC/CT))和rs10402677位点(等位基因T,变体T(TT/TC),SLE患者中携带T等位基因(TT/TC))括号内项目的值及意义都分别与rs8102519的相对应部分相同。GTC单体型P=0.039,OR=0.563,95%CI 0.324-0.978;ACT单体型P=0.039,OR=1.777,95%CI 1.023-3.087;rs8102519、rs8103285、rs10402677中任一两位点间的D’都>0.9,r2也都>0.9;CAECAM1基因SNP位点在SLEDAI及性别分组中,P值均>0.05,无统计学意义。CEACAM1基因SNP位点突变型的相对于野生型的而言,其相应的CRP、C3、C4水平大体上升高的,而ESR、Ig G、Ig A、Ig M水平大体上降低,仅ESR项,P=0.0178,C3项,P值=0.0085,差异具有统计学意义。结论:rs8102519、rs8103285、rs10402677三个位点之间存在着非常强的连锁不平衡;这三个位点的突变型等位基因可能为SLE的易感基因;ACT单体型可增加患SLE的可能;发生这三个位点突变的患者体内的免疫细胞功能可能受到一定程度的抑制。第三部分构建CEACAM1启动子区域(包含rs8103285、rs8102519位点)荧光素酶报告基因目的:构建出CEACAM1启动子区域(包含rs8103285、rs8102519位点)突变型和野生型荧光素酶报告基因,为今后研究CEACAM1对SLE影响提供实验依据。方法:以基因重组技术为手段,以带Amp抗性的p GL3荧光素酶质粒为载体,扩增CEACAM1启动子区域(包含rs8103285、rs8102519位点)的荧光素酶报告基因,并用试剂盒检测其荧光素水平。结果:重组质粒用Kpn I和Hind III双酶切后各自都得到两条条带,一条接近500bp的目的基因片段,一条4800bp左右的p GL3片段;测序验证重组质粒中已包含目的基因片段;转染纯合突变型p GL3-CEACAM1-1985重组质粒的293T细胞的荧光强度明显高于转染野生型p GL3-CEACAM1-1985重组质粒的293T细胞的,P<0.05。结论:成功构建了CEACAM1启动子区域(包含rs8103285、rs8102519位点)即CEACAM1-1985荧光素酶报告基因;rs8103285、rs8102519位点纯合突变之后,其启动子活性得到了显著提高,CEACAM1表达可能会增加。