miR200c靶基因PCDH8对食管鳞癌增殖、侵袭和血管生成的作用

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目的研究miR-200c靶基因PCDH8对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、侵袭及血管形成的作用。方法采用TargetScan、PicTar等miRNA靶基因预测软件筛选出miR-200c候选靶基因PCDH8;荧光素酶报告基因实验验证PCDH8为miR-200c的靶基因;免疫组化检测食管鳞癌组织中PCDH8的表达并分析其与临床病理参数间的关系;qPCR及检测KYSE-150细胞株与HET-1A细胞株的PCDH8和miR-200c mRNA及蛋白的表达Western blotting水平;PCDH8基因过表达载体转染KYSE-150细胞株,观察转染后KYSE-150细胞增殖、迁移、侵袭及血管形成的改变。结果(1)荧光素酶报告基因实验证实PCDH8为miR-200c的靶基因;(2)与对照组相比,食管鳞癌组织中PCDH8表达降低(P<0.05),PCDH8表达与肿瘤大小(P值=0.011)、组织学分级(P值=0.002)和淋巴结转移(P值=0.017)相关;(3)与正常食管鳞状上皮HET-1A细胞相比,KYSE-150细胞miR-200c表达显著增加(P<0.05),而PCDH8表达降低(P<0.05);(4)CCK8检测显示过表达PCDH8的KYSE-150细胞增殖受到抑制;(5)Transwell法显示PCDH8过表达KYSE-150细胞的侵袭能力显著降低;(6)定量ELISA检测显示,PCDH8过表达的KYSE-150细胞中VEGFA表达下调;(7)血管形成实验表明,PCDH8过表达的KYSE-150细胞的血管形成降低。结论(1)PCDH8是miR-200c的靶基因,miR-200c抑制食管鳞癌细胞与组织中PCDH8的表达;(2)食管鳞癌组织中,miR-200c表达上调,而PCDH8表达下调,提示两者参与了食管鳞癌的发生、发展过程;(3)转染PCDH8的食管癌细胞株KYSE-150,其增殖、侵袭及血管形成降低,而细胞凋亡增加,提示PCDH8在食管癌中可能发挥着抑癌基因的作用。
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