【摘 要】
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目的:以TCGA数据库中的肺腺癌患者RNA测序数据为基础,对转录因子对肺腺癌患者的生存预后与表达调控进行分析;以PD-L1抑制剂为代表,初步探索多次静脉注射抗PD-L1抗体对正常小鼠所能产生的不良反应及对肿瘤浸润免疫细胞的影响。方法:通过R程序中的Survival、edge R、Seurat、NMF等包对TCGA数据库中的公共数据进行分析,通过NMF聚类将肺腺癌患者分类;通过edge R对差异基因
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目的:以TCGA数据库中的肺腺癌患者RNA测序数据为基础,对转录因子对肺腺癌患者的生存预后与表达调控进行分析;以PD-L1抑制剂为代表,初步探索多次静脉注射抗PD-L1抗体对正常小鼠所能产生的不良反应及对肿瘤浸润免疫细胞的影响。方法:通过R程序中的Survival、edge R、Seurat、NMF等包对TCGA数据库中的公共数据进行分析,通过NMF聚类将肺腺癌患者分类;通过edge R对差异基因进行分析;通过Survival包对生存期进行分析;通过随机森林进行特征基因的筛选;通过ESTIMATE算法对免疫微环境进行分析;通过蛋白免疫印迹（Western Blot）与实时荧光定量PCR（q RTPCR）技术检测小鼠组织中PD-L1的浓度;通过尾静脉注射向小鼠注射抗PD-L1抗体,每次给药量为200μg/只,每周注射一次,观察小鼠状态与生存时间;通过超声心动图检测小鼠心脏射血分数,左心室短轴缩短率,左心室舒张末期容积等参数;通过小动物生命体征监护仪检测小鼠心电特征与体温;酶联免疫标记检测小鼠血清中甲状腺素浓度;通过GEO数据库中数据对小鼠经抗PD-L1抗体治疗后免疫微环境的变化。结果:通过对基因表达谱的分析,与转录因子数据库中的转录因子列表进行对比,我们筛选出240个差异表达的转录因子;通过240个差异表达的转录因子将肺腺癌患者分为三个亚组,组间基因表达范式有着显著的区别,且N1组与N2&N3组生存预后有着显著差异（P=0.00089）;随机森林筛选出30个代表性的基因,可用于预测患者分型及预后;在抗PD-L1抗体实验中,接受4次抗PD-L1抗体注射后,小鼠的死亡率达60%。进一步通过超声及心电图检测这些小鼠发现,小鼠的心脏射血功能严重受损,心肌代偿性增生;心电图提示小鼠心肌缺血,且心电传导或自动节律明显受到影响;HE染色结果显示注射抗PD-L1抗体的小鼠心脏组织出现代偿性增生。此外,小鼠注射抗PD-L1抗体后体温异常降低:小鼠平均体温为38.2℃,而注射抗PD-L1抗体后10分钟后,小鼠平均体温降至37.23℃,并出现了明显萎靡不振状态,体内甲状腺素T4水平降至对照组的三分之一;而补充L-甲状腺素可以显著缓解这些症状,同时能明显降低小鼠死亡率。抗PD-L1抗体处理的小鼠肿瘤微环境中浸润的T细胞减少,NKT细胞和巨噬细胞均有所增多;肿瘤微环境中各类细胞的PD-1表达量均有增多。结论:通过差异表达的转录因子对肺腺癌患者分组后,组间患者基因表达有显著差异,并从中提取出特征表达的差异基因或转录因子,对肺腺癌患者的生存进行预测,作为生物检测的Biomarker;抗PD-L1抗体会导致小鼠心脏射血功能下降,心电传导异常;抑制PD-1/PD-L1的免疫调节极有可能是原发性甲减发生的原因之一;抗PD-L1抗体对小鼠免疫细胞分群亦有显著影响。在临床上应用抗PD-L1抗体治疗肿瘤患者的同时,应该警惕抗PD-L1抗体对人体可能带来的心脏损伤和神经免疫负调节作用。
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