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目的：通过对比流式细胞仪和荧光显微镜两种检测荧光染色的方法,探讨流式细胞仪检测人精子质膜完整、DNA碎片指数、线粒体活性和顶体完整的可行性,并探讨流式细胞仪PI/RH123联合染色法检测精子质膜完整和线粒体活性的可行性。方法：选择2015年9月-11月在广西医科大学第三附属医院生殖医疗中心门诊就诊的不孕夫妇,男方精液常规分析结果在WHO第5版正常范围内的精液标本共120份,按染色方法随机分成A、B两组,A组：单染组(60份),使用碘化丙啶(PI)染色检测精子质膜完整、吖啶橙(A0)染色检测DNA碎片指数、罗丹明123(RH123)染色检测线粒体活性和异硫氰酸荧光素标记的花生凝集素(FITC-PNA)染色检测顶体完整。染色后将标本随机分为A1组和A2组各30份,分别使用流式细胞仪(FCM)和荧光显微镜(MIC)检测,比较两组检测结果,评估流式细胞仪单染的可行性；B组：PI/RH123双染组,使用PI单染检测精子的质膜完整、RH123单染检测线粒体活性作为对照,使用PI/RH123联合双染检测精子质膜完整与线粒体活性。染色后将标本随机分为B1组和B2组各30份,分别使用流式细胞仪(FCM)和荧光显微镜(MIC)检测,比较两组检测结果,评估流式细胞仪PI/RH123双染的可行性。结果：1.A1组FCM单染和A2组MIC单染的结果比较：A1组和A2组检测精子质膜完整率分别为76.2±9.70%、73.88±8.40%,DNA碎片指数(DFI)分别为9.89±1O.37%和10.02±7.56%,线粒体活性分别为66.67±19.88%、69.20±9.04%,顶体完整率为80.88±23.56%、83.69±6.70%,A1组和A2组结果比较,差异均无统计学意义(P>0.05)；2.B组PI/RH123双染组的单染和双染结果比较：PI、PI/RH123检测质膜完整的结果比较,B1组分别为70.08±10.25、69.86±9.80,B2组分别为68.74±9.18、67.84±12.02,差异均无统计学意义(P>0.05)；RH123. PI/RH123检测线粒体活性的结果比较,B1组分别为55.69±12.82、49.39±13.13,B2组分别为57.14±10.47、55.04±9.25,差异均无统计学意义(P>0.05)；3.B1组FCM双染和B2组MIC双染的结果比较：PI/RH123染色结果PI-/RH123+、PI-/RH123-、PI’/RH123-, B1组分别为49.39±13.13、20.47±10.47、24.67±15.00,B2组分别为49.15±9.62、18.69±13.27、26.27±12.74,差异均无统计学意义(P>0.05)；4.精子质膜完整与精子总活力、前向运动均呈正相关性,DFI与前向运动呈负相关性,线粒体活性与前向运动呈正相关性,p均<0.05；5.精子质膜完整与线粒体活性正相关(p<0.05),与DFI、顶体完整无明显相关性(P>0.05)；DFI与线粒体活性负相关(p<0.05),与顶体完整无明显相关性(P>0.05)。结论：1.流式细胞仪单种染色检测精子质膜完整、DNA碎片指数、线粒体活性、顶体完整具有可行性,检测效率高；2.利用流式细胞仪PI/RH123联合染色同时检测精子质膜完整与线粒体活性具有可行性,检测效率高。