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鸡传染性支气管炎病毒（Infecfious bronchitis virus,IBV）可引起鸡呼吸道、生殖道和肾脏病变及腺胃肿大,传染性强、致死率高,呈世界范围分布,是危害养禽业的重要疫病之一。IBV编码6种蛋白,位于病毒囊膜表面的纤突蛋白（S）是病毒主要的免疫原,S是由S1、S2亚单位组成。S1主要功能是结合细胞膜上受体,但只有在与S2的共同作用下,才能启动病毒与细胞膜融合。由于S1亚单位与病毒组织嗜性、致病性和免疫原性密切相关,对其研究较多,但作为协同作用启动IBV感染的S2片段,决定着IBV能否进入易感细胞而产生致病作用,因而明确S2亚单位生物学地位,以及S2与S基因进化间的关系,能更客观地分析IBV进化规律和致病分子基础。 IBV具有高度变异性,血清型众多,并且不同血清型之间交叉保护非常小或没有保护作用,因而对IBV的控制是个难点。探讨利用新技术控制IBV成为预防该病的一个重要课题。 RNA干扰（RNAi）是近年来发展起来的一项新技术,由于其具有强大的抗病毒效应,很快就成为控制病毒性疾病的新手段,尤其是一些重要病毒性疾病,现有药物和疫苗无法提供较好保护作用时,RNAi技术无疑提供了非常有前景的手段。RNAi已成功应用于多种病毒感染治疗,如脊髓灰质病毒、轮状病毒、呼吸道合胞体病毒、流感病毒、人严重急性呼吸道疾病。但对禽病毒方面却没有研究,有鉴于此,我们对利用siRNA技术控制IBV增殖的效果进行了研究。 1 上海地区IBV分离鉴定及S2基因检测、分析 对临床发病疑似IB的鸡群,采集病料,接种9日龄SPF鸡胚,24h-48h收集尿囊液,盲传3代,RT-PCR检测、测序为IBV阳性的,取尿囊液电镜观察病毒粒子,部分在电镜下观察到典型的冠状病毒粒子,共分离到10株上海地区IBV流行株。 根据GenBank中发表的IBV S基因序列,设计合成了一对引物,模拟PCR表明,该引物对能扩增现有已发表的所有IBV的S2基因核酸序列,扩增片段493bp。分别以本室保存的IBV疫苗株H52和IBV分离株建立了检测S2基因片段的RT-PCR体系,检测体系灵敏度达10-50ELD50,检出限量为0.1ng。对上海地区疑似IBV样品（肾、喉、气管）34份进行检测,阳性为32份。将扩增片段克隆入pMD18-T载体,经PCR鉴定和序列分析表明均为肾变型IBV S2基因片段。