选择性降解木质素复合菌的筛选及其降解园林废弃物的效果研究

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园林废弃物作为一类重要的生物质资源,含有大量的木质纤维素,若能够实现对园林废弃物的高效利用,可以极大的缓解能源短缺的压力。园林废弃物中木质素和半纤维素通过共价键连接成紧密的网络结构,纤维素束镶嵌其中,对纤维素起到良好的保护作用,也给纤维素的利用带来了巨大的困难。本试验研究了复合菌对木质素的降解作用,从腐木及其周围土壤中筛选出具有选择性降解木质素功能的复合菌,并将复合菌应用到园林废弃物的降解中,探究不用菌种对园林废弃物中木质纤维素的降解性能。本试验从华南农业大学树木园的腐木及其周围土壤中,筛选出4组具有降解木质素功能的复合菌,DT-1、DT-2、DM-1和DM-2。4组复合菌经过5代复筛培养后,均能够稳定生长,最适pH为7.5-8.0。复合菌DM-1能在16天内对园林废弃物中木质素的降解率达到28.37%,选择性系数(SV)为2.78,纤维结晶度降低10.35%,能够较好的破坏园林废弃物中的木质纤维素结构,表明复合菌DM-1具有较强的选择性降解木质素的功能。将筛选到的4组复合菌分别接种到以碱木素、滤纸条和酸处理木屑为碳源的培养基中,探究不同碳源对复合菌降解木质纤维素的影响。4组复合菌在不同碳源培养基中,均能够正常生长。DM-1在碱木素培养基中生长最稳定,对碱木素和滤纸条的降解率分别为49.50%和24.18%,对碱木素降解的选择性系数(SV)为2.05,显著高于其他3组复合菌(p<0.05)。复合菌DM-1对酸处理木屑的降解率最高,为33.46%。在三种培养基的不同生长时期,复合菌DM-1的木质素酶活力稳定,始终显著高于纤维素酶活力,说明复合菌DM-1对木质素的选择性降解功能不受碳源种类的影响。利用微生物基因序列的PCR扩增技术和16S rDNA基因测序方法对复合菌DM-1的V3-V4区进行鉴定,发现复合菌observed species指数、chao指数、ace指数和OTU数值均达到7,说明复合菌DM-1具有较高的物种多样性。复合菌DM-1在属的分类水平上主要是由寡养单细胞菌属(Stenotrophomonas)、无色菌属(Achromobacter)、中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium)、Pandorase和纤维菌属(Cellulosimicrobium),这5类菌属组成,其中寡养单细胞菌属(Stenotrophomonas)占所有菌种的92%,是该复合菌中的主导菌属。利用传统纯培养技术研究复合菌DM-1的菌种组成,共分离得到12株单菌,其中3株真菌、4株细菌和5株放线菌。利用DT-1(TTDT)、DM-1(TTDM)、Pleurotus ostreatus(TTPO)、Auricularia auricula(TTAF),采用菌袋固体培养的方式降解园林废弃物,探究它们在实际应用中对园林废弃物的降解效果。试验结果表明:4种不同菌种均能够在菌袋中正常生长,15天内菌丝可长满菌袋。TTDT和TTDM的失重率分别为10.99%和10.24%,高于TTPO和TTAF,且DM-1对园林废弃物中木质素的降解率可达到24.10%,显著高于Pleurotus ostreatus和Auricularia auricula的降解效率(p<0.05)。虽然在菌袋固体培养中DM-1对园林废弃物中木质素的选择性降解能力较液体培养弱,但其对园林废弃物的木质纤维素结构有明显的破坏能力(SEM图),可有效增加园林废弃物纤维素的表面积,有利于提高后期纤维素的利用率。
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