拟南芥CLE1多肽激素和类受体激酶LRR140的功能研究

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多肽激素是一种新型植物激素,参与了植物的生长、发育以及环境响应等多个生物学过程。本论文重点关注CLAVATA3/EMBRYO SURROUNDING REGION(CLE)多肽激素家族,其大部分成员的功能仍然未知。前期研究证明多肽激素的信号一般是被植物中最大的受体家族—富亮氨酸重复类受体激酶家族(LRR-RLK)成员所识别。本研究主要包括两部分工作,第一部分是对于编码小分子多肽的CLE家族成员CLE1的功能研究,第二部分则是关于表现出胚胎发育异常的富亮氨酸重复类受体激酶家族(LRR-RLK)成员LRR140的功能研究。  利用本实验室前期建立的显性负突变技术,获得了一个地上部分较野生型更为健壮的突变体CLE1G6T。构建其自身启动子及终止子融合GUS报告基因的表达载体,发现CLE1在雄蕊、雌蕊、叶、维管束以及侧根冠均有表达。因此推测CLE1G6T植物健壮的地上部分可能是由异常的营养运输或是功能缺陷的光系统Ⅱ所导致。半薄切片结果显示CLE1G6T植物相较于野生型在茎中具有更多的维管组织,但根中的维管组织数目差异不明显。对CLE1G6T植物光系统Ⅱ的功能和效率进行检测,结果显示其与野生型相比并无明显差异。为鉴定CLE1多肽激素的受体,订购了LRR-RLKs209个成员的T-DNA插入突变体,并利用PCR技术对其进行了基因型鉴定,目前共获得138个T-DNA插入纯合突变体。  LRR140是富亮氨酸重复类受体激酶家族(LRR-RLK)的一个成员,其突变体lrr140表现出早期胚胎发育异常,细胞分裂模式从8-细胞胚胎时期发生异常,细胞分裂紊乱,胚胎败育在球形期。为了解析LRR140的表达,构建了其自身启动子融合GUS报告基因的表达载体(pLRR140∶.GUS),经GUS染色观察发现LRR140在子叶、真叶、根的维管束以及心形期到子叶期的胚胎中均有表达。由于lrr140表现出与toad2rpl1双突变体类似的胚胎败育表型,本人研究利用BiFC体系在烟草中检测了LRR140与TOAD2、RPK1三个受体激酶之间可能存在的相互作用,结果表明LRR140和RPK1都能够与TOAD2相互作用,但LRR140不与RPK1相互作用,因此推测LRR140、TOAD2和RPK1可能形成一个受体复合体,调控胚胎发育早期细胞正常分裂。
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