【摘 要】
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红鳍笛鲷(Lutjanus erythropterus)和金焰笛鲷(Lutjanus fulviflamma)隶属于笛鲷科(Lutjanidae)、笛鲷属(Lutjanus Bloch),属于近海暖水性鱼类,红鳍笛鲷生活于为近底层而金焰
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红鳍笛鲷(Lutjanus erythropterus)和金焰笛鲷(Lutjanus fulviflamma)隶属于笛鲷科(Lutjanidae)、笛鲷属(Lutjanus Bloch),属于近海暖水性鱼类,红鳍笛鲷生活于为近底层而金焰笛鲷生活于浅水层,这两种鱼类都是经济价值比较的高捕捞品种。目前,国内外对笛鲷属鱼类的研究集中在在养殖技术、病理研究、环境胁迫、系统发育等方面,在视蛋白基因方面的研究甚少。本论文以红鳍笛鲷和金焰笛鲷为研究对象,对长波长敏感性视蛋白(LWS)和视杆蛋白(RH)进行原核载体构建和真核表达,主要结果如下:1、用特异性引物LWSF/R扩增出红鳍笛鲷目的基因LWS全长,并克隆到pMD-18T中,测序正确后,定向连接到原核表达载体pET-32a中,成功构建红鳍笛鲷LWS基因的原核表达载体并命名为pET-32a-LWS。2、用特异性引物ZLWSF/R扩增出两种笛鲷的LWS基因的开放阅读框,克隆到pMD-18T中,测序验证后,定向连接到真核表达载体pPICZαA中,成功构建红鳍笛鲷LWS基因和金焰笛鲷LWS基因的真核表达载体并分别命名为pPICZα-LWS-Ler和pPICZα-LWS-Lfu。3、用特异性引物ZRHF/R扩增出两种笛鲷的RH基因开放阅读框,并克隆到pMD-18T中,测序正确后,连接到真核的表达载体pPICZαA中,经验证,成功构建红鳍笛鲷RH基因和金焰笛鲷RH基因的真核表达载体并分别命名为pPICZα-RH-Ler和pPICZα-RH-Lfu。4、将真核表达载体pPICZα-LWS-Ler、pPICZα-LWS-Lfu、pPICZα-RH-Ler以及pPICZα-RH-Lfu经SacⅠ线性化后,电击转化进巴斯德毕赤酵母中,用甲醇30℃诱导,其中成功表达出目的蛋白红鳍笛鲷LWS,金焰笛鲷LWS和金焰笛鲷RH,并发现其最优的诱导时间为12h。而红鳍笛鲷RH诱导失败。
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