论文部分内容阅读
天然蛋白具有抗氧化活性、抗菌活性、降血压活性等生物活性,可广泛应用于各类食品中,但天然蛋白质中得到的活性肽存在着一个明显的局限性,即其一级结构肯定来源于原料蛋白质一级结构中的某一部分,所以活性肽的活性也必定取决于原料蛋白质的一级结构。如若仅仅采用酶水解蛋白质的方式分离得到的活性肽往往不能达到人们对其活性的期求,故而研究人员将目光放在了肽分子结构的修饰上,以期望得到更高活性的肽。本研究首先利用不同蛋白酶对大豆蛋白及酪蛋白进行水解,再通过类蛋白合成反应导入酪氨酸、苯丙氨酸及色氨酸三种疏水性芳香族氨基酸制备出不同的修饰产物。选择具有较高抗氧化活性的修饰产物,用3：7乙醇水溶剂(E-W)对其进行分级处理,并用两种蛋白的水解物为对照,对水解物、修饰产物以及分级产物的抗氧化活性进行分析评价。建立人胎肝细胞过氧化损伤模型,评估分级后的修饰产物对H202诱导的人胎肝细胞损伤的保护作用。研究结果如下：(1)采用碱性蛋白酶水解大豆蛋白,木瓜蛋白酶水解酪蛋白,并通过对水解物的水解度及其相关抗氧化活性的测定,以确定水解时间。最终选出大豆蛋白水解时间为6h、酪蛋白水解时间为2h时,水解产物作为类蛋白合成反应的底物。此时大豆蛋白、酪蛋白水解物的水解度分别为10.12%和9.42%、DPPH清除率分别为29.18%和38.71%。(2)采用单因素法确定大豆蛋白水解物导入外源氨基酸(酪氨酸、苯丙氨酸或色氨酸)的最适添加比为0.60mol/mol水解物游离氨基。酪蛋白水解物导入上述氨基酸的最适添加比为0.74mol/mol水解物游离氨基。(3)3：7乙醇水溶剂分级处理抗氧化活性较好的修饰产物。分级后产物的上清部分比之沉淀部分具有更高的DPPH清除活性,超氧阴离子清除活性及还原能力。此结论说明分级处理可有效的提取出具有更高抗氧化活性的物质。(4)采用对数生长期细胞,添加不同浓度(0.5、1、2mg/m1)所制抗氧化肽,37℃培养24h、48h及72h后,加入5mmol/L的H202溶液诱导损伤1.5h,以未添加抗氧化肽和H202组为对照组,仅添加H202组为损伤模型组。MTT法测定细胞存活率,实验证明添加类蛋白产物的细胞损伤模型能显著的增加细胞存活率,证明蛋白修饰产物对H202诱导的人胎肝细胞损伤具有保护作用。(5)添加浓度为1mg/ml的抗氧化肽在37℃培养48h后,加入5mmol/L的H202溶液诱导损伤2h,对细胞内丙二醛(MDA)生成量、谷胱甘肽(GSH)含量及过氧化氢酶(CAT)的活性检测,可以看出添加,与损伤组相比,添加修饰产物的细胞中MDA生成量显著降低,GSH含量及CAT活性均有不同程度的提高,从而证实所制抗氧化肽对氧化损伤的细胞具有保护作用。