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目的:糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy DR )是糖尿病常见微血管并发症之一,也是使人致盲的眼病之一,如何及早正确的防治DR成为亟待解决的问题。但是其发病机制尚不十分清楚。近年来研究发现DR与许多炎性因子的变化密切相关,其视网膜病理改变更是具有慢性炎症的特征,因此有人提出DR是一种炎症性疾病。核因子-κB( nuclear factor kappaB, NF-κB)又称κ基因结合核因子,是一类参与一系列基因表达调控的关键性核转录因子,多种不同的刺激信号可激活核转录因子参与细胞凋亡及炎症反应。NF-κB介导细胞炎症反应的信号通路可能是通过TLR4受体信号转导途径。Toll样受体是一天然模板识别受体家族,能识别固有性模板,其介导的信号转导通路在对抗外来病原体的天然免疫应答中起重要作用。而TLR4是NF-κB的上游调控因子。越来越多的研究已经发现TLRs与眼部的免疫和炎症反应密切相关。因此,采用药物抑制NF-κB信号通路激活是DR药物治疗的重要切入点。氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)是我国传统中药苦豆子、苦参、广豆根等槐属植物中生物碱的主要成份。大量药理和临床试验证明,氧化苦参碱(oxymatrine, OMT)可抑制NF-κB,降低多种炎症因子的活化,具有抗凋亡的药理作用,且不良反应较少。本研究采用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,通过观察视网膜中TLR4和NF-κB的变化,以及OMT对视网膜的保护作用及其对NF-κB的信号转导通路的抑制作用,进一步探讨炎症因素在糖尿病视网膜病变发病机制中的作用。方法:将30只SD健康雄性大鼠用STZ腹腔注射制成糖尿病大鼠模型,随机分成实验对照组( n=15)和实验组(n=15).实验组大鼠每天经口灌胃OMT100 mg/kg,一天一次,直到实验结束;实验对照组则经口灌胃等体积生理盐水,一天一次,直到实验结束。另设15只正常健康雄性SD大鼠为空白对照组,不采取任何干预措施。3个月后腹腔注射过量水合氯醛处死全部大鼠,留取视网膜组织,应用免疫组织化学技术和逆转录多聚酶链反应(Reverse Transcription–Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)检测视网膜TLR4及NF-κB的表达变化。用SPSS13.0统计软件完成统计学分析。结果:1光镜观察:空白对照组大鼠视网膜各层排列整齐;实验对照组神经节细胞总数较空白对照组明显减少,差异有统计学意义(t=19.615, P < 0.01),视网膜各层排列紊乱;实验组神经节细胞数目较实验对照组明显增加,差异有统计学意义(t=27.674,P < 0.01),视网膜各层紊乱程度较轻.2免疫组化结果显示正常大鼠视网膜TLR4呈弱阳性表达,实验对照组TLR4在视网膜血管内皮细胞上表达增强,与空白对照组比较,差异有统计学意义(t=13.544,P < 0.01);实验组TLR4表达则低于实验对照组,表达水平明显受到抑制,差异均有统计学意义(t=20.920,P < 0.01)。RT-PCR检测显示TLR4mRNA表达的规律与免疫组化的变化规律相似。实验对照组TLR4mRNA的表达较空白对照组明显升高,差异有统计学意义(t=15.09,P < 0.01);实验组较实验对照组明显降低,差异有统计学意义(t=31.972,P < 0.01)。3免疫组化结果显示正常大鼠视网膜NF-κB呈弱阳性表达于神经节细胞层,实验对照组NF-κB在视网膜神经节细胞层,内核层,外核层表达增强,与空白对照组比较,差异有统计学意义(t=14.364, P < 0.01);实验组表达水平则低于实验对照组,差异有统计学意义,(t=27.107,P < 0.01)。RT-PCR检测显示NF-κBmRNA表达的规律与免疫组化的变化规律相似,实验对照组NF-κBmRNA的表达较空白对照组明显升高,差异有统计学意义(t=30.431,P < 0.05);实验组较实验对照组明显降低,差异有统计学意义(t=18.464,P < 0.05)。结论:糖尿病大鼠视网膜各层排列紊乱,神经节细胞数目减少,糖尿病大鼠视网膜发生形态学改变。本实验显示糖尿病大鼠视网膜TLR4和NF-κB的表达显著升高;应用抗炎药OMT能够通过有效抑制TLR4和NF-κB的表达,减轻视网膜各层紊乱程度,减少神经节细胞数目丢失,降低糖尿病大鼠视网膜损伤,说明OMT可以减轻视网膜的结构损害。OMT对NF-κB表达的抑制作用是其视网膜保护作用的可能机制,TLR4可能介导了此视网膜保护机制。