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目的:本实验旨在研究人宫颈癌组织中IER5基因的表达与辐射剂量的效应关系,以及氯化两面针碱对人宫颈癌Hela细胞中IER5基因表达的影响,初步探讨氯化两面针碱的辐射增敏作用。材料与方法:本实验收集整理44例宫颈癌组织,均取自2011年11月至2012年12月期间在辽宁省肿瘤医院的宫颈癌患者的组织标本。其中包括治疗前组、10Gy辐射组、20Gy辐射组、30Gy辐射组、40Gy辐射组、50Gy辐射组和放疗量≧50Gy辐射组。采用werstern blot检测IER5蛋白表达量情况。同时体外培养人宫颈癌Hela细胞为研究对象,用不同浓度的氯化两面针碱处理Hela细胞24小时和48小时,及氯化两面针碱联合辐射处理Hela细胞,用MTT法检测Hela细胞生长抑制情况;用流式细胞仪检测Hela细胞凋亡情况,用werstern blot检测Hela细胞IER5蛋白表达量情况。结果:1辐射对宫颈癌组织IER5表达:治疗前组灰度值为0.87±0.15,10Gy辐射组灰度值为0.81±0.13,20Gy辐射组灰度值为1.37±0.19,30Gy辐射组灰度值为1.53±0.47,40Gy辐射组灰度值为1.12±0.24,50Gy辐射组组灰度值为0.95±0.83,>50Gy辐射组灰度值为1.05±0.26。10Gy辐射组与治疗前组相比P=0.636>0.05,差异不具有统计学意义;20Gy辐射组、30Gy辐射组及40Gy辐射组分别与治疗前组相比P<0.05,其差异具有统计学意义;50Gy辐射组及>50Gy辐射组分别与治疗前组相比P>0.05,其差异不具有统计学意义。30Gy辐射组与其他组相比P<0.05,其差异具有统计学意义。2氯化两面针碱对Hela细胞的影响2.1.MTT法检测细胞增殖活性结果显示:氯化两面针碱能够抑制Hela细胞生长,并呈一定的“时间-剂量”依赖性(P<0.05),氯化两面针碱联合辐射后其“时间-剂量”依赖性依然存在(P<0.05)具有统计学意义。氯化两面针碱联合辐射组与单纯用药组相比,对肿瘤细胞的生长抑制率前者高于后者,差异(P<0.05)具有统计学意义。氯化两面针碱在4μg/ml组在48小时后抑制率达47.7%接近半数抑制率,使用ORIGIN50软件分析MTT数据及分析画图测出48小时氯化两面针碱IC50为3.97418μg/ml。2.2流式细胞术检测细胞凋亡结果:氯化两面针碱能够使Hela细胞凋亡,并呈一定的“时间-剂量”依赖性(P<0.05),联合辐射后其“时间-剂量”依赖性依然存在(P<0.05),差异具有统计学意义。氯化两面针碱联合辐射组与单纯用药组相比,在同一时间、同一浓度相比细胞凋亡率前者高于后者(P<0.05),差异具有统计学意义。2.3. Western blot印迹杂交检测蛋白IER5的表达变化结果:4Gy辐射剂量下辐射组与对照组,辐射组IER5表达量是对照组的1.29倍,这表明辐射能够诱导Hela细胞IER5表达量上调。药物组与对照组相比,IER5表达量是对照组的1.47倍,这表明氯化两面针碱可能诱导IER5表达上调。辐射联合药物组与辐射组相比,IER5表达量是辐射组的1.21倍,IER5表达量是对照组的1.47倍。结论:1宫颈癌组织中IER5基因在辐射剂量20~40Gy之间时,IER5蛋白表达上调,在一定的辐射剂量下,IER5基因随着辐射剂量增加表达量大致呈先升高在下降的趋势,并且30Gy辐射组IER5基因上调最明显。2氯化两面针碱能够抑制宫颈癌Hela细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,并呈一定的“时间-剂量”依赖性(P<0.05);氯化两面针碱联合辐射后能够抑制宫颈癌Hela细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,呈一定的“时间-剂量”依赖性(P<0.05)。其机制可能与上调辐射敏感基因IER5有关。