论文部分内容阅读
目的:研究脂肪干细胞玻璃体腔注射对大鼠青光眼模型的视网膜神经节细胞的保护作用,并初步探讨可能的机制。方法:培养脂肪干细胞,培养至P4接近单层融合时,收集并调整细胞密度备用。将大鼠分为四组:青光眼干细胞组、青光眼对照组、正常眼压干细胞组和正常眼压对照组,采用烙闭表层巩膜静脉的方法制备大鼠青光眼模型,均以右眼为操作眼,青光眼干细胞组、青光眼对照组行造模手术,正常眼压干细胞组、正常眼压对照组行假手术操作。手术操作3周时,三组均行玻璃体腔注射操作,青光眼干细胞组注射物为5×105 ADSCs悬浮液6?L,青光眼对照组注射物为DMEM液6?L,正常眼压对照组注射物为5×105 ADSCs悬浮液6?L,正常眼压对照组注射物DMEM液6?L。分别测量并记录术前、术后1周、2周、3周、4周、5周、6周眼压。实验完成后将动物处死,随机摘取眼球,分别进行冰冻切片HE染色、免疫荧光染色处理,并进行q RT-PCR检测BDNF m RNA表达量。结果:造模后1周,模型眼相对于假手术眼,IOP平均升高10.9±2.1mm Hg,并能在预定实验时间6周内保持这一水平。而在对各组进行移植操作后,青光眼干细胞组的IOP降低水平在移植操作后1、2、3周时均显著高于青光眼对照组(p<0.001)。HE染色青光眼干细胞组、青光眼对照组与正常眼压干细胞组、正常眼压对照组相较均出现后极部视网膜各层变薄,RGC层细胞排列紊乱,RGC数量减少,但青光眼对照组较青光眼干细胞组病理改变严重。免疫荧光染色两组青光眼组与两组正常眼压组相较,荧光染色淡,神经节细胞数明显减少,青光眼对照组较青光眼干细胞组减少更明显。除正常眼压两组间外,其他各组间在400倍荧光显微镜下RGC计数差异均具有统计学意义,计数:青光眼对照组<青光眼干细胞组<正常眼压干细胞组/正常眼压对照组。BDNF m RNA各组之间差异具有统计学意义(*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001),两两比较差异具有统计学意义,且BDNF m RNA表达量:青光眼干细胞组>正常眼压干细胞组>青光眼对照组>正常眼压对照组。结论:脂肪干细胞玻璃体腔移植对大鼠青光眼模型视网膜神经节细胞具有保护作用,可能通过降低眼压和增多BDNF等途径发挥保护作用。