澳洲坚果油粕多糖与糖蛋白的分离纯化与特性研究

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为充分开发利用澳洲坚果(Macadamia ternifolia F.Muell)资源,本文研究澳洲坚果油粕中的多糖和糖蛋白的提取、分离纯化、结构鉴定和功能活性。采用L9(33)进行正交实验优化了提取澳洲坚果油粕多糖的温度、料液比等工艺参数,采用响应面实验优化了提取糖蛋白的pH、温度等工艺参数,经两次柱层析得糖蛋白组分M-1,采用紫外光谱扫描、红外光谱扫描、DSC扫描、氨基酸自动分析仪和高效液相色谱等仪器和方法确定M-1的结构,并评价其体外消化性、抗氧化活性以及免疫活性。主要研究结果如下:1.提取澳洲坚果油粕多糖最优条件为提取温度100℃,料液比1:20,提取时间3 h,在此条件下,多糖最大得率为1.75%。2.采用响应面Box-Behnken试验,优化得出澳洲坚果油粕糖蛋白最优提取条件为:料液比1:19.63、提取温度93.63℃、提取时间2.93 h、pH 9.63,在此条件下,多糖提取率为6.98%,蛋白提取率为5.31%。3.依次用DEAE-52阴离子交换柱和Sephadex G-100凝胶柱对澳洲坚果油粕提取物进行分离纯化得纯糖蛋白M-1,高效凝胶色谱鉴定其纯度为99.54%,分子量为472 kDa,含有55.81%的多糖,其单糖组成主要为鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖,单糖摩尔比为1:2:4:6;M-1含有34.13%的蛋白,主要由14种氨基酸组成,含量最高的三种氨基酸为苯丙氨酸、精氨酸和组氨酸;DSC证实M-1热变性温度为157℃,热变焓值为123.3J/g;β-消除反应证实M-1的糖肽键主要类型为O-型连接。4.当M-1浓度为10 mg/mL时,其总还原力、DPPH自由基清除率和羟基自由基清除率都达到最大;硫代巴比妥酸法实验结果表明M-1具有一定的抗油脂氧化能力。5.M-1的综合消化率为16.93%,结合对比国家标准农业部869号公告:试样蛋白及其M-1不易被消化水解。6.通过测定M-1对巨噬细胞RAW 264.7的增殖影响,表明M-1不会对巨噬细胞造成毒害作用。
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