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目的近年来,随着经济的发展及生活方式的改变,肥胖的发生率在全球范围内迅速增加,尤其我国肥胖率在2014年已高达11%。肥胖属于一种代谢综合征,往往引起2型糖尿病、心血管疾病、非酒精性脂肪肝及高血压等的发生,严重威胁人类的健康。越来越多的学者关注肥胖形成的机制研究,发现过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptorsγ,PPARγ)在肥胖的发生与发展中起着关键性作用。已证实PPARγ属于配体激活的核受体转录因子,在脂肪生成、脂质代谢中发挥重要作用,并且在能量代谢调节中扮演着重要的角色。我们课题组前期通过形态学观察发现,枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)可以明显减小高脂喂养小鼠模型中脂肪细胞的大小。因此,我们提出假设,LBP是否通过PPARγ改善高脂诱导的肥胖及其可能的分子作用机制。方法1.釆用高脂饲料喂养C57BL/6小鼠建立体内肥胖模型,选取40只雄性C57BL/6小鼠(周龄:6-8周;体重:18-20克),随机分为4组:普食组、高脂组、100 mg/kg LBP+高脂组及200 mg/kg LBP+高脂组。每周监测体重、饮食及饮水量,持续喂养24周,禁食8小时,收集血清及腹部白色脂肪组织,通过酶联免疫吸附法(ELISA)、荧光实时定量PCR(q RT-PCR)等方法检测肥胖相关的生理生化指标。2.采用棕榈酸(palmitic acid,PA)孵育成熟的3T3-L1脂肪细胞建立体外肥胖模型。首先,将3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化为成熟的3T3-L1脂肪细胞,采用100μg/m L,300μg/m L,600μg/m L,900μg/m L LBP孵育成熟的脂肪细胞24小时,蛋白免疫印迹(western blot)技术分析磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、磷酸化PI3K(P-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)、磷酸化AKT(P-AKT)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(P-JNK)、PPARγ及磷酸化PPARγ(P-PPARγ)的表达水平。3.肥胖脂肪细胞模型中,采用10μM PI3K/AKT信号通路抑制剂-LY294002孵育成熟的3T3-L1脂肪细胞1小时;采用20μM JNK信号通路抑制剂-SP600125孵育成熟的3T3-L1脂肪细胞1小时;采用10μM PPARγ激动剂-罗格列酮(rosiglitazone)孵育成熟的3T3-L1脂肪细胞12小时,收集细胞全蛋白,western blot检测P-AKT/AKT、P-JNK/JNK、P-PPARγ/PPARγ的表达水平。采用AKT或JNK小分子干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)转染成熟的3T3-L1脂肪细胞24小时,western blot检测P-AKT/AKT、P-JNK/JNK、P-PPARγ/PPARγ的表达水平。结果1.C57BL/6小鼠及3T3-L1脂肪细胞的肥胖模型经LBP干预后,各项肥胖指标均显著下降。2.3T3-L1脂肪细胞的肥胖模型中,P-PPARγ和P-AKT含量降低,P-JNK含量增加。经LBP干预后,P-PPARγ和P-AKT含量增加,P-JNK含量降低。3.3T3-L1脂肪细胞的肥胖模型加入PI3K/AKT抑制剂LY294002或转染AKT si RNA后,AKT和P-PPARγ表达均降低。另外加入JNK抑制剂SP600125或转染JNK si RNA后,JNK和P-PPARγ表达均降低。结论1.LBP具有改善肥胖的作用。2.LBP通过活化PI3K/AKT通路,抑制JNK磷酸化的表达来增强P-PPARγ的表达。3.LBP通过抑制PPARγ活性减少脂肪的生成,从而改善肥胖。