论文部分内容阅读
目的观察脑出血肝阳化风证患者用镇肝熄风汤对证治疗与大定风珠非对证治疗并与健康对照组比较外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cells,PBMCs)双向凝胶电泳图谱及蛋白质表达的动态变化,从以方测证的角度探讨脑出血肝阳化风证的蛋白质谱表达规律,寻找脑出血肝阳化风证的证效关系蛋白质,进一步阐释脑出血肝阳化风证的本质内涵。方法选取脑出血肝阳化风证患者20例随机分为两组,分别予以镇肝熄风汤对证治疗及大定风珠非对证治疗,健康对照组10例;抽取静脉血10ml,用淋巴细胞分离液分离PBMCs,抽提PBMCs中的蛋白,利用固相梯度双向凝胶电泳技术建立正常组及脑出血肝阳化风证组、镇肝熄风汤对证治疗组、大定风珠非对证治疗组的PBMCs蛋白双向凝胶电泳图谱,经PDQuest8.0软件分析,选取差异表达的蛋白质点,应用MALDI-TOF-MS质谱仪获得肽质量指纹图谱,用Mascot软件搜索数据库鉴定部分差异表达蛋白质。结果经双向凝胶电泳和图像分析,筛选出22个差异表达蛋白质点。其中脑出血肝阳化风证与健康对照组比较有20个差异表达蛋白质点,8个蛋白质点表达下调,7个蛋白质点表达上调,5个蛋白质点缺失;脑出血肝阳化风证经镇肝熄风汤对证治疗后与健康对照组比较4个蛋白质点表达下调,5个蛋白质点表达上调,2个蛋白质点缺失,9个蛋白质点表达与健康人无明显差异;脑出血肝阳化风证大定风珠非对证治疗后与健康对照组比较12个蛋白质点表达下调,5个蛋白质点上调,3个蛋白质点表达与健康人无明显差异。20个蛋白质点中共有8个得到鉴定,其中脑出血肝阳化风证与健康对照组比较6个蛋白表达下调,1个蛋白表达上调,1个蛋白质缺失;脑出血肝阳化风证经镇肝熄风汤对证治疗后与健康对照组比较2个蛋白表达下调,1个蛋白缺失,5个蛋白表达与健康人无明显差异;脑出血肝阳化风证用大定风珠非对证治疗后与健康对照组比较8个蛋白均表达下调。结论(1)初步建立了脑出血肝阳化风证(镇肝熄风汤对证治疗)方证效应关系的外周血单个核细胞蛋白质双向凝胶电泳图谱。(2)初步鉴定了脑出血肝阳化风证对证治疗方证效应的相关蛋白,这些蛋白功能涉及细胞代谢、信号转导、电子传递、细胞骨架等。(3)研究发现,镇肝熄风汤对证治疗则能有效地调节多个异常表达的蛋白,非对证治疗则使蛋白表达明显异常,体现了中医辨证论治的科学性。(4)初步揭示了镇肝熄风汤治疗脑出血肝阳化风证的作用机制一多靶点蛋白的调节作用。