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目的:研究口咽癌细胞对放疗联合EGFR靶向治疗抗拒的机制,并寻求联合治疗抗拒口咽癌细胞的有效介导靶点,为临床提高口咽癌放疗联合西妥昔单抗靶向治疗疗效提供新的切入点和实验基础。方法:1.采用Western blot检测内质网应激信号通路及DNA双链断裂、凋亡、自吞噬等相关蛋白表达,包括IRE1α、PERK、ATF6、GRP78、LC3B、Atg16L1、cleaved-PARP等。2.RT-PCR检测经过西妥昔单抗预处理的口咽癌细胞Fadu和Detiot562射线诱导ERS伴侣蛋白GRP78mRNA表达水平。3.集落克隆形成实验检测口咽癌细胞Fadu和Detiot562经过西妥昔单抗、射线及转染反义siRNA等处理后生存情况。4.CCK-8实验检测口咽癌细胞Fadu和Detiot562增殖活性。结果:1.应用西妥昔单抗,提高口咽癌细胞Fadu放射敏感性,但对Detroit562细胞放射敏感性无显著影响,即使进一步增加西妥昔单抗浓度至100μg/ml,仍未见增加Detroit562细胞放射敏感性。2.西妥昔单抗抑制Fadu细胞中射线诱导GRP78,IRE1α和ATF6蛋白的表达,而对Detroit562细胞无显著影响,但同时抑制了两种细胞中辐射诱导PERK蛋白的表达。3.转染反义siRNA沉默PERK,IRE1α或ATF6后,结果示沉默IRE1α和ATF6抑制Fadu和Detroit562细胞中射线诱导内质网伴侣蛋白GRP78蛋白活化,而沉默PERK对GRP78蛋白表达没有显著影响。4.西妥昔单抗抑制Fadu细胞中射线诱导GRP78 mRNA的表达(与照射组相比,*P<0.05),而对Detroit562细胞未见作用。5.予口咽癌细胞Fadu和Detroit562射线照射后,Fadu细胞中射线诱导GRP78蛋白在照射后20min表达开始增加,3h达到高峰,持续高水平表达到照射后48h。而Detroit562细胞中辐射诱导GRP78蛋白的表达在照射后20min达到高峰,照射后48h下降。6.沉默GRP78的提高Fadu和Detroit562细胞的放射敏感性,Fadu和Detroit562细胞的放射增敏比(SER)分别为1.19和1.21。7.沉默GRP78抑制辐射诱导的DNA双链断裂修复蛋白DNA-PK及自噬标记蛋白LC3B和相关蛋白Atg16L1的表达。8.Ly294002和3-MA增加Fadu和Detroit562细胞辐射诱导的凋亡相关蛋白cleaved-PARP的表达,并抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。从而抑制细胞增殖,增加细胞凋亡。9.转染反义siRNA入Fadu和Detroit562细胞沉默GRP78,并予西妥昔单抗联合处理,西妥昔单抗抑制Fadu细胞克隆形成及细胞增殖,而沉默GRP78使其进一步增强。此外,沉默GRP78逆转口咽癌细胞对于西妥昔单抗联合放疗的抗拒性。结论:EGFR靶向治疗西妥昔单抗抑制射线诱导口咽癌细胞ERS信号通路IRE1α/ATF6-GRP78活化,进而抑制射线诱导DNA双链断裂修复及自吞噬,诱导细胞凋亡增加放射敏感性。