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目前,多发性骨髓瘤(MM)仍是一种不可治愈的疾病,其中重要的原因是MM细胞DNA损伤修复基因表达上调,导致其耐药增加,细胞凋亡减少。通过反义核酸技术抑制肿瘤DNA损伤修复基因表达,增加肿瘤细胞放化疗敏感性,有效清除肿瘤细胞,是肿瘤基因治疗的一项重要策略。然而,诱导DNA损伤修复基因沉默的靶向性和特异性差是目前限制其应用的两个重要因素。选择多发性骨髓瘤细胞特异地抑制DNA损伤修复基因表达,是靶向性增强MM细胞化疗敏感性的关键。RNA干扰(RNAi)技术阻断基因表达具有高稳定、高效率和高特异的特点,完全有可能作为一种新的分子生物学工具成为肿瘤基因治疗的新手段。脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)又称氧化还原因子(Ref-1),具有DNA损伤修复和氧化还原两个相对独立的功能区,是一种细胞烷化剂致伤和DNA放射损伤的重要修复因子。因此,检测不同疗效多发性骨髓瘤患者APE1蛋白的表达,分析APE1与MM治疗及预后的关系,并建立多发性骨髓瘤特异的APE1 RNAi表达体系对靶向诱导APE1基因沉默增加化疗敏感性具有重要意义。 研究目的 1、研究APE1蛋白在MM细胞中表达情况,分析APE1表达与MM疗效的关系,以确证APE1为MM治疗有效的靶基因。 2、构建MM特异性APE1siRNA表达载体,并鉴定其对MM细胞APE1基因的特异性敲除作用。 3、探讨诱导APE1基因沉默对MM化疗的增敏作用。 研究内容和方法 1、APE1蛋白在多发性骨髓瘤细胞中的表达及其意义 收集临床MM患者的骨髓标本及完整临床病历资料,采用免疫细胞化学、双标免疫荧光结合激光共聚焦显微镜和Western blot方法检测MM患者骨髓及MM细胞株KM3中APE1蛋白的表达,并分析其表达与MM临床分型、疗效的关系。 2、MM特异的APE1siRNA表达载体构建及功能鉴定