论文部分内容阅读
近年来,免疫抑制性病毒越来越受到人们的关注。鸡群中存在免疫抑制性病毒的感染,会使鸡群对其它病毒或细菌不仅变得更为易感,而且使其感染的症状、病变不典型。除此之外,还会造成鸡群对某些疫苗的免疫反应下降甚至不反应,导致免疫失败。可引起免疫抑制的病毒很多,主要有鸡马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性贫血病病毒(CAV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、网状内皮组织增殖症病毒(REV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)和呼肠孤病毒(ReoV)等。这些病毒往往共同作用,以二重感染或多重感染的方式造成鸡的免疫抑制,使疾病的诊断更加复杂。鉴于以上原因,建立准确可行的检测免疫抑制性病毒的方法是非常必要的。在本研究中我们设计了四个试验,对CAV和MDV的检测方法及某些毒株的免疫抑制性进行了初步研究。试验1我们以山东省某肉鸡场14日龄疑似鸡贫血病病毒(CAV)感染的发病鸡为例对CAV的实验室诊断方法进行了研究。从病料中直接提取组织DNA,其余病料的研磨上清接种MDCC-MSB1细胞(简称MSB1)。通过聚合酶链式反应(PCR)技术和抗CAV特异性高免血清的间接免疫荧光反应(IFA)进行检测,证明分离到了鸡贫血病毒,暂命名为C14。试验1结果表明该鸡群中存在CAV的感染。在本研究中我们发现,用IFA方法检测CAV感染特异性强,阳性检出率为6/9,但所需时间相对较长。用PCR方法检测感染病料的MSB1细胞基因组DNA和病料组织DNA,阳性检出率分别为4/9、2/9。从该研究的结果可知用病料上清接种MSB1细胞后,用IFA对CAV检测更加可靠。试验2我们将试验1中用IFA技术和PCR技术鉴定为阳性的鸡贫血病毒C14株接种SPF鸡胚后测定其病毒效价。将试验1中用PCR扩增的鸡贫血病毒特异性片段用于标记CAV探针,用核酸斑点杂交试验测定C14病毒的EID50。同时将C14毒株按10-4-10-7稀释后卵黄囊接种12枚8日龄鸡胚,将C14病毒接种的出壳鸡饲养至7日龄时称取体重,进行红细胞记数并计算免疫器官指数。同时用核酸斑点杂交、PCR两种方法分别对胸腺、<WP=11>脾脏、骨髓进行CAV检测。试验2结果证明胚胎接种该C14病毒出壳的鸡,免疫器官均受到不同程度的损害,该病毒可引起严重的免疫抑制;在两种对CAV进行检测的方法中,核酸斑点杂交方法具有敏感、特异的优点,并且一次可以检测的样品数量较大,是CAV检测的好方法。试验3,用1日龄非免疫鸡接种马立克氏病病毒(MDV)I型RB1B株6天后,采血分离外周血液单核细胞(PBMCs)。将PBMCs部分作成悬液,部分固定涂片,用间接免疫荧光试验(IFA)检测MDV在外周血液单核细胞(PBMCs)的感染状况。试验3结果发现,自接种I型强毒RB1B株后第6天,两种方法均能检出RB1B株引起的病毒血症,对两种检测MDV的方法进行比较可知,直接对PBMCs悬液做间接免疫荧光试验(IFA)具有特异、敏感、阳性结果易判断等优点。利用这种方法可以大致判断鸡群被感染的状态,并且可以检测MDV疫苗的免疫效果,同时也可以检测野毒感染。试验4,我们用MDV的超强毒株RB1B和强毒株GA分别感染鸡后,比较不同致病型毒株对新城疫病毒(NDV)疫苗和传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗抗体反应的影响。在测试RB1B毒株试验中,攻毒组与对照组各取40只鸡,2周龄时攻毒组腿肌注射RB1B株感染的鸡胚成纤维细胞悬液(约1500PFU/只)。在46日龄、57日龄、61日龄分别测试血清的HI滴度和抗IBDV抗体滴度。在测试GA株试验中,攻毒组35只鸡,对照组25只鸡,攻毒组于7日龄时腿肌注射GA株感染的鸡胚成纤维细胞悬液(约2000PFU/只)。于33日龄、42日龄、51日龄分别采血测试血清的HI滴度和抗IBDV抗体滴度。所有鸡按常规免疫程序进行NDV疫苗和IBDV疫苗免疫,攻毒组与对照组隔离饲养。试验4结果证明RB1B株试验中攻毒组与对照组比较, HI抗体滴度在46日龄、57日龄差异极显著,61日龄时,差异显著。表明RB1B株对新城疫疫苗的免疫应答影响显著。对法氏囊病毒疫苗免疫反应两组间无明显差异。强毒株GA感染鸡虽然对NDV疫苗免疫效果也有影响,但与超强毒株RB1B相比,后者感染鸡对疫苗免疫效果影响更严重,能造成更大的免疫抑制。本试验中,两个毒株RB1B和GA均对NDV疫苗免疫有明显的影<WP=12>响,但对IBDV疫苗的免疫影响未见显著差异。