蝴蝶兰组培快繁技术及褐变控制研究

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本研究以健康成株的蝴蝶兰花梗腋芽为外植体,采用单因素、二因素完全随机试验设计获得蝴蝶兰无菌苗,筛选出丛生芽途径进行快繁的各阶段的最适培养基;以无菌苗的叶片为外植体采用单因素、二因素完全随机试验设计诱导出类原球茎,进一步分化成无菌苗,筛选出叶片诱导类原球茎进行快繁的各阶段的最适培养基,并且对叶片褐变控制进行研究。研究结果如下:1、蝴蝶兰诱导丛生芽快繁途径各阶段最适培养基(1)中部腋芽为最佳部位,萌芽率为43.33%。(2)花梗腋芽诱导丛生芽最适培养基为1/2MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+椰乳10%,诱导率达80%,褐变率低。(3)丛生芽的继代增殖培养基仍沿用诱导培养基,增殖系数为2.89,丛生芽颜色翠绿,生长健壮。(4)无菌苗生根壮苗最适培养基为1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L,生根率100%,平均生根数4.18条,平均叶片数5.23片。2、叶片诱导类原球茎快繁途径各阶段最适培养基(1)叶片诱导类原球茎最适培养基为VW+6-BA5.0mg/L+椰乳10%,诱导率为54.44%。诱导的类原球茎个大、饱满,生长健壮,有利于增殖。(2)类原球茎增殖培养基为1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L+香蕉汁200g/L,增殖系数为3.41。增殖速度快,类原球茎颜色翠绿,表面湿润,排列疏松。(3)类原球茎分化培养基为1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.4mg/L+香蕉汁200g/L,分化整齐一致,移栽成活率高。(4)其它因素对增殖的影响:液体培养、薄层切割、10个类原球茎切块均有助于增殖。3、对蝴蝶兰的褐变控制进行研究,结果如下:(1)对叶片进行10d黑暗预处理,褐变率降至为48.60%。(2)添加不同种类和浓度的抗褐变剂,均可降低褐变率,以添加2g/LAC效果最好,褐变率降至35.80%,且不影响类原球茎的诱导。(3)对培养材料进行热激处理1h,褐变率降至45.17%,培养材料长势良好。
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