松乳菇菌丝体分离、培养及其rDNAITS分子鉴定研究

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松乳菇(Lactarius deliciosus),系红菇科、乳菇属真菌。其味道鲜美独特,营养丰富,可食用也可药用,市场上十分走俏。它与松树共生,是一种菌根食用菌,因其有特殊的生态条件、营养方式和子实体分化条件,目前尚不能人工栽培,市场供应全靠野生采集,由于野生松乳菇过度采摘,导致产地自然资源严重破坏,产量逐渐减少。为了保护食用菌资源多样性和满足消费者对食用菌的需求,松乳菇的人工栽培成为目前国内外研究的热点。松乳菇人工栽培的关键问题是生产出大量的菌丝体,故培养食用菌菌丝体是开发利用菌根真菌的先决条件。本论文对野生松乳菇的组织分离、菌丝的纯培养和菌丝的分子鉴定进行了研究。主要研究结果如下: 1.松乳菇的菌种可通过松乳菇组织分离或孢子分离得到。本实验采用组织分离获得松乳菇的纯菌种,但其分离成功率低,易污染,可采用以下几个要点进行组织分离:①种菇须选用生长健壮,菇形正常,菌柄粗壮实心。②种菇采集后应立即进行分离,如上午采集的种菇,中午至下午进行分离为好,不要过夜。③熟练的操作。 2.通过松乳菇菌丝体在固体平板培养基上的培养观察,结果表明松乳菇菌丝体生长的适宜条件是:菌丝在PDA或PDA综合培养基上生长较好,最适生长温度为26℃,培养基最适pH值为5.2,对碳源中果糖利用较好,对氮源中NH4NO3利用较好。 3.针对松乳菇分离菌丝体目前难出菇的现实,运用分子生物学技术,对松乳菇组织分离菌株rDNAITS区域进行测序分析,通过和GenBank中已知乳菇属的种进行序列比对,构建系统发育树,通过树图分析,鉴定出分离菌株就是松乳菇的纯菌种。
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