SCs共培养对hUMSCs向胰岛前体细胞诱导分化的影响

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目的: 研究支持细胞( sertoli cells, SCs)共培养对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUMSCs)向胰岛前体细胞诱导分化的影响。  方法: 1.分离培养hUMSCs与SCs,免疫细胞化学技术鉴定两种细胞表面分子;2.采用分阶段联合诱导因子使hUMSCs向胰岛前体细胞方向诱导,倒置相差显微镜观察诱导后的细胞形态改变;免疫细胞化学技术检测诱导后细胞中nestin、insulin和C-peptide的表达情况。3.取P4代hUMSCs分成三组:以单独诱导hUMSCs作为因子组(factor group FG),SCs与hUMSCs共培养后添加诱导因子为实验组1(experimental group1 EG1);共培养后没有添加诱导因子为实验组2(experimental group2 EG2);P4代hUMSCs作为空白对照组(control group CG)。4.Western blot技术检测在这三种条件下诱导后的细胞表达胰岛前体细胞相关因子Ngn3和Pdx1的情况。5. ELISA技术检测上清液中C-peptide的表达情况。  结果: 1.采用组织块植入法分离培养细胞,免疫细胞化学技术检测到hUMSCs阳性表达CD90、CD105;阴性表达CD34、CD45;采用酶消化法分离培养SCs,免疫细胞化学技术检测阳性表达FAS-L。2.倒置相差显微镜观察到诱导后细胞胞体呈圆形或椭圆形,类上皮样细胞,聚集成胰岛样集落。3.免疫荧光细胞技术检测到诱导过程中的各个时间点均表达nestin和第17、21天表达C-peptide和insulin。4.Western blot技术检测到诱导后的细胞在各时间点均表达Ngn3和Pdx1,FG、EG1、EG2与CG比较具有显著差异性(P<0.01);5. ELISA技术检测到各组细胞均表达C-peptide,FG、EG1与CG1比较具有显著差异性(P<0.01);EG2与CG2比较具有显著差异性(P<0.01);EG2与FG、EG1比较具有显著差异性(P<0.01)。  结论: SCs与hUMSCs共培养,可促进hUMSCs向胰岛前体细胞分化,在诱导过程中出现Ngn3和Pdx1的表达。
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