伯克霍尔德氏菌Burkholderia contaminans B-1对玫瑰香葡萄采后病害生防潜力研究

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玫瑰香葡萄因其含糖量高、香味浓郁而深受消费者喜爱。但是,由于皮薄、含汁量大等特点在采后贮藏中易被病原微生物侵染而发生腐烂,虽然目前使用的SO2熏蒸结合低温贮藏技术可以有效抑制葡萄采后病害发生,但是,会产生病原菌抗药性增加、环境污染、损害人体健康等一系列问题,因此需要寻找一种新的技术来逐渐取代它。生物防治正是目前公认的采后贮藏极具潜力的保鲜方法。本研究以玫瑰香葡萄为实验试材,研究伯克霍尔德氏菌(Burkholderia contaminans B-1)对葡萄采后病原菌体内外抑制效果,以及其可能的抑菌机理。并对其培养基进行优化,研究结果表明:(1)在离体条件下,用处于对数生长末期的拮抗菌即24h培养液与灰葡萄孢霉(Botrytis cinerea)在培养皿中进行对峙培养,抑菌圈最大可达2.81cm,说明该菌产生有抑菌活性的代谢产物。拮抗菌和病原菌进行接触和非接触对峙时,发现只有接触时拮抗菌才体现抑菌效果。用拮抗菌的不同处理液处理灰葡萄孢霉(Botrytis cinerea),菌悬液和培养原液有很强的抑菌作用,无菌过滤液无明显抑菌效果,推测抑菌活性物质可能存在于胞内或胞壁。此外拮抗菌对B.cinerea孢子萌发、芽管伸长和菌丝形态均有影响。和果蔬采后常见病原菌对峙培养时,均可有效抑制其菌丝的正常生长,表明此菌及其代谢产物具有广谱抑菌作用。(2)在活体条件下,采前给葡萄果穗喷淋拮抗菌可显著降低入库前果实表面带菌量,给果实伤口接种拮抗菌不同时间培养液和不同处理液时发现,24 h培养液和培养原液处现果实发病率和病斑直径最小。用不同浓度培养液和不同处理液浸泡果实后,于26℃、16℃和0℃三个不同温度下贮藏,结果可知,三个不同温度下,拮抗菌均可有效抑制葡萄采后灰霉病的发生,而0℃条件下对葡萄贮藏的腐烂控制效果最好,三个不同温度下,5倍培养液和菌悬液贮藏效果显著好于其他处理液,将拮抗菌和病原菌同时接种于果实伤口发现,拮抗菌延缓了伤口处B.cinerea孢子萌发和菌丝伸长。另外,拮抗菌处理可以降低果实贮藏期间基本营养物质含量下降的速率,一定程度上维持了果实的基本品质。(3)拮抗菌处理对果实苯丙烷代谢途径和活性氧代谢途径中关键物质苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、多酚氧化酶(PPO)活性,几丁质酶(CHI)和β-1,3葡聚糖酶(GLU)活性都有所提高,此外还降低了超氧阴离子(O2-·)产生速率,促进过氧化氢(H2O2)含量积累,延缓过氧化氢酶(CAT)活性峰值出现的时间。(4)通过响应面优化试验筛选出拮抗菌生长的最优配方即2.11%麦芽浸粉、1.9%酵母提取物、0.05%磷酸二氢钾和0.05%硫酸锰。
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