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花药培养技术作为产生变异和加快性状稳定的辅助手段,已在水稻育种上广泛应用。通过花药培养获得的水稻植株中,具有丰富的倍性变异,通常需在成熟期基于形态特征识别单倍体、二倍体及多倍体。花培植株中的单倍体必需进行染色体染色体加倍才能用于育种实践。本研究采用抗微管除草剂Oryzalin(3,5-二硝基N4,N4-丙基磺胺)与秋水仙碱进行了水稻单倍体加倍效果的比较实验,并探讨了使用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)进行倍性鉴定相关的技术及利用石蜡切片法对不同倍性的花培植株茎解剖结构进行比较研究。其主要结果如下: 1.比较Oryzalin与秋水仙碱对水稻单倍体的染色体加倍效果,设置了三组处理。(1)分别用浓度为1.25mmol/L、2.50mmol/L、5.00mmol/L的秋水仙碱和10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L的Oryzalin对单倍体植株进行浸根24h加倍处理(以上各溶液均添加2%的二甲基亚砜);(2)以添加2%的二甲基亚砜(DMSO)的2.50mmol/L的秋水仙碱、50μmol/L Oryzalin溶液分别设置12h、24h、48h处理;(3)在2.50 mmol/L的秋水仙碱、50μmol/L Oryzalin溶液中分别添加0%、1%、2%、4%DMSO进行浸根24h加倍处理。结果发现,对于FC311添加2%的二甲基亚砜的1.25mmol/L秋水仙碱和添加2%的二甲基亚砜的25μmol/L Oryzalin的加倍处理效率最高分别为30.6%和13.9%;而在FC322中,添加2%二甲基亚砜的2.50mmol/L秋水仙碱和添加2%二甲基亚砜的50μmol/L Oryzalin的加倍处理效率最高,分别为25.0%和22.2%。本研究表明秋水仙碱仍是水稻单倍体加倍的最有效的处理剂。 2.采用6种细胞核分离缓冲液制备用于流式细胞术分析使用的水稻细胞核悬液,发现使用Otto buffers和Marie’s nuclear isolation buffer产生的变异系数较小(CV分别为3.57%和3.41%),其次为Lysis buffer LB01(CV为4.75%),但Otto buffers的成分及制备的条件最简单。Tris-MgCl2 buffer产生较多的背景碎片。作者推荐使用Otto buffers制备水稻细胞核悬液。 3.以花药培养获得的粳稻FC311单倍体(2n=x=12)、二倍体(2n=2x=24)、三倍体(2n=3x=36),以及FC322单倍体(2n=x=12)、二倍体(2n=2x=24)、四倍体(2n=4x=48)植株为材料,利用石蜡切片法研究和分析了它们茎的解剖结构。结果表明,供试材料节间维管束数及大小及、茎壁组织面积、维管束面积基本上随着倍性的增加而增加。而表