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茶尺蠖(Ectropis obliqua Prout)和灰茶尺蠖(Ectropis grisescens Warren)是我国茶园的主要食叶型害虫。茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis obliqua Nuclear Polyhedrosis Virus,EoNPV)是茶尺蠖的主要病原微生物,目前已登记为病毒类微生物农药。近年来田间使用时发现EoNPV不仅可以感染茶尺蠖而且对其近缘种灰茶尺蠖也具有一定的致病力。为明确EoNPV对茶尺蠖与灰茶尺蠖致病力的差异及其产生原因。本研究以茶尺蠖和灰茶尺蠖作为研究对象,测定了EoNPV感染后茶尺蠖和灰茶尺蠖体内病毒增殖动态,构建了茶尺蠖感染EoNPV和正常对照的中肠转录组,分析了茶尺蠖和灰茶尺蠖EoNPV感染后类免疫球蛋白基因的表达水平,以期揭示EoNPV对茶尺蠖和灰茶尺蠖致病力差异的免疫互作机理。主要研究结果如下:1茶尺蠖和灰茶尺蠖幼虫体内病毒增殖动态结果显示:病毒感染12小时后茶尺蠖和灰茶尺蠖体内的病毒相对拷贝数就差生了明显差异,至病毒感染96小时后茶尺蠖幼虫体内病毒相对拷贝数接近灰茶尺蠖的14倍,中肠组织病毒相对拷贝数接近灰茶尺蠖的8倍,说明EoNPV能够成功感染茶尺蠖和灰茶尺蠖,但灰茶尺蠖体内的增殖速度明显低于茶尺蠖,也就是说EoNPV对灰茶尺蠖的致病力明显低于茶尺蠖。2茶尺蠖感染EoNPV前后中肠转录组结果显示:通过Illumina HiSeqTM 2000高通量测序和Trinity软件拼接后,共获得平均长度为717bp的unigene 25869条,其中有13733条unigene成功注释到Nr、Nt、Pfam、KOG、Swiss-Prot、KEGG和GO数据库,占总数的53.1%;GO分类结果显示9246条unigene被分到GO三大类的55个节点,其中43条unigene与免疫系统过程(immune system process)有关,占总量的0.47%;KOG分类结果显示通用功能(General function prediction only)的unigene数最多为1278条,信号转导机制(Signal transduction mechanisms)和防御机制(Defense mechanisms)中的部分unigene可能参与昆虫对病毒的免疫代谢;KEGG分析获得198条unigene参与免疫系统(Immune system);比较EoNPV感染前后unigene表达量,共获得差异基因133条,其中上调基因80条,下调基因53条。3.类免疫球蛋白基因(Hemolin)克隆和表达分析结果显示:茶尺蠖类免疫球蛋白基因全长1772 bp,(GenBank登录号:KM885983),包含1239 bp的开放阅读框,编码412个氨基酸;灰茶尺蠖类免疫球蛋白的ORF与茶尺蠖类免疫球蛋白ORF序列相似度达99%,预测蛋白分子量大小分别为45.8 kD和45.5kD,等电点(pI)分别为8.297和8.265,两者都属于典型的分泌型蛋白,具有昆虫Hemolin基因保守的4个Ig功能区和2个N-glycosylation位点。荧光定量检测结果表明,EoNPV感染后该基因表达量显著升高,茶尺蠖最高表达量是正常对照的36.5倍,灰茶尺蠖最高表达量是对照的25.3倍,表明Hemolin基因可能参与了两种尺蠖对EoNPV的免疫代谢反应,但与茶尺蠖和灰茶尺蠖致病力差异的关系有待进一步研究。