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Wnt信号通路控制多种细胞的命运,参与细胞的增殖、分化、凋亡等基本过程,在正常组织发育以及肿瘤形成中都起着非常重要的作用。经典Wnt信号转导通路,通过关键因子β-catenin(果蝇中为Armadillo)对靶基因转录进行调控。WNT信号存在的情况下,β-catenin进入核内,与TCF结合,并募集许多转录激活相关因子,从而激活靶基因转录。pygopus通过PHD与Lgs/BCL9直接结合,并由此与β-catenin的N端间接结合。目前已经证实β-catenin与某些组蛋白甲基化转移酶(HMT)复合体成员有关,并且这种相互作用是β-catenin参与Wnt靶基因转录激活的关键机制。染色体重组相关蛋白复合体HMT可以对组蛋白尾部氨基酸残基进行甲基化修饰,这些修饰可以影响组蛋白与DNA的亲和性,从而改变染色体的结构,使其处于相对松弛的状态,以便于转录因子与DNA的结合及其它蛋白质因子的相互作用。本实验室已经通过串联亲和层析(Tandem AffinityPurification,TAP)技术发现了若干与Pygopus2的N端存在相互作用的蛋白,其中包括一些H3K4 HMT蛋白复合体的成员。本文采用RNA干扰技术、GST-PULL DOWN、免疫共沉淀及蛋白免疫印迹技术,对Pygopus2的N端与多个HMT蛋白之间的相互作用进行鉴定和分析,确定人Pygopus2的NHD结构域与多个HMT/HAT复合体组分存在相互作用,其中包括HMT复合体组分WDR5、RbBP5、ASH2L、MLL2、Menin,并进一步确定了这些蛋白与NHD结构域的结合位点。另外也证实了在乳腺癌细胞中,人Pygopus2能够与H3K4me2和H3K4me3在体内结合,并进一步证实外源的NHD结构域能够与H3K4me2和H3K4me3结合,WDR5对组蛋白的甲基化修饰也需要Pygopus的参与。一系列的实验揭示了人Pygopus2的NHD结构域在WNT的靶基因转录激活中可能起着重要作用,这对于深入了解NHD结构域的功能,以及更彻底了解WNT机制都有着重要意义。