【摘 要】
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目的:探究免疫反应在白色念珠菌局部感染致病中的作用,及硼酸凝胶对于白色念珠菌感染的治疗效果和对机体局部免疫功能的影响。方法:1、实验动物及分组:40只同批次SPF级雌性ICR小鼠,按随机数字表法分为2组,即空白组（B组）10只、实验组30只,其中实验组又随机分为阴性对照组（NC组）、氟康唑凝胶组（FG组）和硼酸凝胶组（BG组）,每组10只。2、本次研究已取得本校动物实验伦理委员会认证同意。3、实验
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目的:探究免疫反应在白色念珠菌局部感染致病中的作用,及硼酸凝胶对于白色念珠菌感染的治疗效果和对机体局部免疫功能的影响。方法:1、实验动物及分组:40只同批次SPF级雌性ICR小鼠,按随机数字表法分为2组,即空白组（B组）10只、实验组30只,其中实验组又随机分为阴性对照组（NC组）、氟康唑凝胶组（FG组）和硼酸凝胶组（BG组）,每组10只。2、本次研究已取得本校动物实验伦理委员会认证同意。3、实验过程:利用雌激素建立小鼠假发情模型,在此基础通过阴道接种浓度为1.0×10~9CFU/m L的白色念珠菌菌丝悬液,每只20μL,构建小鼠VVC模型。造模成功后,空白组不做处理;实验组给予干预处理:FG组小鼠阴道给予5mg/kg氟康唑凝胶,BG组小鼠阴道给予5mg/kg硼酸凝胶,NC组小鼠阴道给予等量灭菌注射用水,2次/日,连续7天。4、样本检测:样本采集时间为用药前1d及用药后第1d、3d、5d、7d。在监测时间段内,通过对实验组小鼠肉眼观察及真菌培养,监测药物治疗效果;使用PBS分别采集每组每只小鼠阴道灌洗液,行ELISA法检测局部IFN-γ、IL-4和IL-10表达水平。在用药7d后处死各组小鼠取阴道组织,行HE染色和PAS染色评估局部感染状况,行免疫组化检测各细胞因子在阴道组织中的表达。结果:1、成功建立小鼠局部白色念珠菌感染VVC模型。雌性ICR小鼠阴道感染白色念珠菌后表现为阴道红肿、渗出增多,可见小鼠不间断舔舐外生殖器部位。小鼠阴道灌洗液行真菌免疫荧光检测镜下可见大团菌丝状念珠菌,真菌培养可见奶酪状菌落呈对数生长,提示小鼠VVC模型构建成功。2、阴道持续感染白色念珠菌无明显自愈表现。与空白组相比,NC组造模处可见明显红肿伴有渗出。阴道灌洗液行真菌培养可见奶酪状菌落大量繁殖。小鼠阴道组织行HE、PAS染色,提示白色念珠菌感染后局部炎症反应明显,载菌量显著。表明阴道黏膜对致病真菌的清除率降低,持续的炎症反应影响局部愈合进程。3、硼酸凝胶发挥良好的抗真菌效果。在观察两药物干预组小鼠阴道的治疗效果中发现,硼酸凝胶和氟康唑凝胶用药后均无不良反应。氟康唑凝胶组连续给药7d后,肉眼可见渗出减少、肿胀减轻,创面明显修复;硼酸凝胶组持续给药7d后,可见局部损伤程度减轻,渗出、肿胀大部分消退,创面基本愈合,治疗效果显著。真菌培养结果表明用药后两组的局部含菌量明显减少。阴道组织行HE染色和PAS染色可见,局部炎症显著减轻,载菌量明显下降。证明氟康唑凝胶和硼酸凝胶对阴道白色念珠菌感染均有良好的治疗效果,且硼酸凝胶治疗效果更佳。4、白色念珠菌感染诱导小鼠局部免疫细胞因子表达增加。ELISA结果表明,与空白组对比,NC组各只小鼠阴道灌洗液和阴道组织中细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10表达均显著增加（P＜0.05）,且NC组小鼠阴道灌洗液中细胞因子水平持续高于空白组。此外,在阴性对照组中,随感染时间延长,IFN-γ表达水平先升高后逐渐呈下降趋势,而IL-4和IL-10则持续高表达,Th1/Th2比值逐渐降低。免疫组化结果示,NC组小鼠阴道组织中细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10呈高表达状态。提示在白色念珠菌感染后,局部Th1/Th2型适应性免疫均发挥重要作用,其中Th2型免疫反应可能参与感染发生发展过程。5、硼酸凝胶促使Th1/Th2平衡重心向Th1转移。在与NC组对比中发现,经药物干预后的小鼠阴道灌洗液及阴道组织中,IFN-γ表达持续升高,IL-4、IL-10表达水平逐渐下降。ELISA结果表明,在硼酸凝胶组中,IFN-γ最先呈现升高趋势,IL-4在用药后第3天开始表现出下降趋势;氟康唑凝胶组中,IL-4最先呈现下降趋势,IFN-γ虽上升但水平略低于硼酸凝胶组;两药物干预组IL-10自用药后表达逐渐减少,Th1/Th2比值均逐渐升高。免疫组化结果提示,在用药7天后,两组均表现为IFN-γ高表达,IL-4、IL-10低表达。提示通过硼酸凝胶和氟康唑凝胶治疗后,将局部Th1/Th2平衡的重点再次转移到了Th1。结论:1、硼酸凝胶对于VVC治疗效果显著,且略优于传统抗真菌药物。2、Th1、Th2型免疫反应在白色念珠菌局部感染中起重要作用,其中Th2型免疫促进感染的发生发展过程。3、硼酸凝胶与传统抗真菌药物对机体免疫影响相似,可促进Th1型细胞因子表达,降低Th2型细胞因子表达,将Th1/Th2平衡的重心向Th1转移。
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