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『背景』肌营养不良(muscular dystrophy,MD)是一组遗传性肌肉疾病,主要表现为不同部位的肌肉不同程度的进行性萎缩和无力。根据其临床表现可分为Duchenne型(Duchenne muscular dystrophy,DMD)、Becker型(Becker musculardystrophy,BMD)、肢带型、面肩肱型、眼咽型、先天型、Emery-Dreifuss型。最常见的为Duchenne型/Becker型。该型为X性连锁的主要是男性发病的遗传性肌病。DMD是一种快速进展性肌病,表现为对称性肢体无力,四肢近端较远端严重,腓肠肌假性肥大。一般12岁之前丧失独立行走能力。还可伴有扩张性心肌病、智能低下、夜盲等。大多在15-25岁死亡,主要死于呼吸或心脏衰竭。血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)升高。BMD相对良性,病情进展相对较慢。大多在7岁以后发病,在肌肉萎缩和无力分布上与DMD非常相似的。运动时可出现小腿疼痛。也可出现腓肠肌假性肥大。16-80岁左右丧失独立行走能力。血清CK也升高。由于dystrophin蛋白及基因突变所致的疾病,除了DMD/BMD,还可出现心肌病、肌肉痉挛/肌痛综合征、女性携带者、精神发育迟滞及染色体Xp21邻近基因综合征等表现,统称为抗肌萎缩蛋白病(dystrophinopathy)。肢带型肌营养不良(Limb-girdle muscular dystrophy,LGMD)是一组具有共同临床表现但是发病机制迥异的疾病。该组疾病表现为骨盆带肌和肩带肌进行性无力、萎缩。LGMD临床症状可具有明显的差异,有的患者发病年龄小于10岁,病情较重,临床进展迅速;有的患者发病较晚,临床症状较轻,进展缓慢。LGMD被分为常染色体显性遗传的LGMD(AD-LGMD或LGMD1)和常染色体隐性遗传的LGMD(AR-LGMD或LGMD2)。再根据基因和蛋白缺陷分为不同的亚型。Tagawa等在研究发现LGMD2B在LGMD中占19%,LGMD2A为21%。在日本,LGMD发病位于第二位的亚型是LGMD2B。目前分子生物学技术的快速发展,关于该组疾病的责任基因及编码蛋白已逐渐被人们所认识,并逐渐应用在诊断上。目前国内对于此方面的研究相对较少。『目的』1、评价IHC和WB在dystrophinopathy诊断中各自的优势。优化蛋白水平的诊断方法。2、对于临床表现不典型的dystrophinopathy病例,依靠IHC难以判断dystrophin蛋白缺失,进一步行WB检测dystrophin蛋白,明确诊断。3、多条带WB筛选疑诊LGMD,明确诊断。4、分析dystrophinopathy和LGMD临床特点及鉴别。『方法』病例来自在北京协和医院神经病理实验室进行肌肉活检的患者。第一部分根据患者的临床特点和肌肉病理改变,筛选37例疑似dystrophinopathy病例的肌肉标本IHC检测dystrophin蛋白(dys-R、dys-N、dys-C三种抗体),其中25例还选用IHC检测α-sarcoglycan、β-sarcoglycan、caveolin3蛋白;对于36例病例(1例未提取足量蛋白)进行WB检测dystrophin蛋白、dysferlin蛋白;收集病例的病史及临床资料;第二部分筛选30例疑似LGMD病例的肌肉标本,IHC检测α-sarcoglycan、β-sarcoglycan、caveolin3蛋白;对于其中26例进行多条带WB检测dystrophin、dysferlin、calpain3及caveolin3蛋白。同时收集病例的病史、临床资料。『结果』在第一部分37例疑诊dystrophinopathies病例中,4例肌纤维膜单一抗体无表达,其余33例肌纤维膜三种抗体有不同程度免疫反应,10例伴有其他蛋白表达异常;36例WB发现条带无表达、条带分子量异常、条带强度减弱、单一抗体无反应及条带正常,其中4例伴有dysferlin表达异常。综合病例的临床表现、肌肉病理检查、IHC和WB分析,诊断dystrophinopathies 32例,其临床表型多样。在第二部分30例疑似LGMD病例中,1例肌纤维膜上β-sarcoglycan免疫反应轻度减弱。1例α-sarcoglycan和caveolin3轻度减弱。26例行多条带WB发现dysferlin蛋白条带无表达或强度减弱9例,calpain3蛋白条带强度减弱或无表达1例,11例多条带均正常,1例dystrophin蛋白条带强度减弱,1例dystrophin蛋白条带可疑双带,且条带强度减弱,其余病例伴有至少2种不同抗体条带强度减弱。诊断dysferlinopathies 9例,LGMD2A 1例。『结论』第一部分的研究结论:1、IHC与WB在检测dystrophin蛋白中的关系:1)IHC显示严重缺失、单一抗体缺失:WB与IHC结果具有一致性,今后此类病例可单做IHC;2)IHC显示轻度缺失:需要进一步行WB检测dystrophin蛋白;3)临床高度疑诊、IHC显示正常:需要进一步行WB检测dystrophin蛋白。2、dystrophinopathy临床特点、鉴别诊断:1)成人发病的BMD与LGMD从临床很难鉴别,需进一步行dystrophin蛋白检测;2)临床无症状或症状轻微、肌酶明显增高、腓肠肌肥大,需进一步行dystrophin蛋白检测;3)心肌病伴有肌酶明显增高,需进一步行dystrophin蛋白检测。3、dystrophin蛋白-基因-临床分型具有一定相关性,但是还有很多的异质性。第二部分的研究结论:1、LGMD患者临床表现复杂多样,单纯从临床确诊困难。2、疑诊LGMD患者中,dysferlinopathy病例多见,其临床表现多为LGMD2B和MM型,个别为单纯血清CK增高。3、本研究中发现LGMD2A患者1例。临床表型为成人肢带型。4、多蛋白条带分析时,可能存在多条带蛋白异常,注意区别蛋白原发、继发缺失,必要时基因检测。