乙型病毒性肝炎(乙肝)是世界流行性疾病，严重地危害着人们的生活和健康。许多研究应用免疫病理和分子生物学技术证实胎盘各层细胞可以感染乙型肝炎病毒(HBV)。但是关于HBV进入靶细胞的机制还不明确。HBV可经胎盘传播至胎儿，造成胎儿宫内感染。乙肝表面抗原(HBsAg)携带孕妇的胎儿宫内感染率为5％～15％。孕期经宫内传播途径造成的胎儿HBV感染，用乙肝疫苗和高效价免疫球蛋白不能阻断，宫内感染是乙型肝炎免疫失败的首要原因。经宫内获得HBV感染的新生儿可成为病毒慢性携带者，并可进一步发展成为肝硬化以至肝癌，严重影响人们生活质量的提高。因此HBV宫内传播机制的研究，成为控制乙肝流行的关键环节之一。 我室从1992年开始，应用现代流行病学、分子生物学和病理学方法，对胎儿宫内HBV感染的危险因素、传播机制和时间进行了深入探讨。研究发现，HBV经胎盘感染胎儿的时间可发生在孕中期。而在孕晚期滋养层变得很薄，HBV更易突破胎盘屏障，所以HBV经胎盘感染胎儿的时间主要发生于孕晚期。为此，本研究取足月分娩的胎盘组织进行HBV宫内传播机制的研究。经过多年的研究我室还提出了胎儿在宫内可经2条途径感染HBV的假说，即血源性和细胞源性途径，其中细胞源性途径是：HBV首先感染第四军医大学博士学位论文孕妇的蜕膜细胞和绒毛滋养层细胞，然后经过“细胞转移”，最后使胎儿绒毛毛细血管内皮细胞受感染并最终导致胎儿宫内感染。但对于HBV进入胎盘细胞的具体方式，还没有明确的结论。研究表明，受体介导的内化是病毒进入细胞的主要方式之一，关于HBV感染细胞的机制研究也集中在病毒与受体的相互作用上。HBv是嗜肝DNA病毒，人们在肝细胞感染的研究中，发现人膜联蛋白V (hAnV)是HBV感染靶细胞的可能受体，它启动和触发了HBV的感染。本研究以hAnV为研究对象，对hAnV在胎盘的分布及其与HBV宫内感染的关系进行初步研究。另外，人们在研究中发现了抗体依赖的病毒感染增强作用，其中一种形式就是病毒与IgG抗体结合形成复合物，经细胞表面的Fc段受体介导，以内化的方式进入细胞内。我室已对FcY受体与HBv宫内感染的关系进行了初步的研究，本研究对其中跨膜受体FcY受体m(Fc丫Rln)在胎盘细胞上的分布进行检测，同时，以补体C3c为研究对象，以证实胎盘组织上存在HBsAg一抗一HBs一补体C3c复合物，并对F卿Rlll在介导该复合物跨越滋养层细胞引起HBV宫内感染过程中所起的作用做进一步的研究和证实。 材料与方法:2001年8月至2002年1月在陕西省妇幼保健医院足月分娩的血清学HBsAg阳性孕妇，连续收集其分娩的足月胎盘组织共39例，血清学HBsAg阴性孕妇娩出的足月胎盘组织4例。同时收集产妇及其新生儿静脉血，离心分离血清后贮存于一20℃冰箱中，以便统一进行HBs^g、H氏Ag检测。取1 .semxl。mxZem大小的楔形胎盘组织块(包括胎儿面和母体面)，浸泡于40留L多聚甲醛溶液中固定，常规石蜡包埋，切成4pm厚的切片备用。另外，我们取体外培养的滋养层细胞，包括已感染HBV和未感染HBV的滋养层细胞，制成细胞爬片备用。HBsAg、HBeAg检测采用ELISA方法;对39例血清学HBsAg阳性孕妇娩出的胎盘组织采用SABC免疫组织化学方法进行HBsAg筛检;对血清学HBsAg阳性和阴性第四军医大学博士学位论文孕妇娩出的胎盘组织采用SABC免疫组化方法检测hAnV和F卿犯H，并在体外培养的滋养层细胞上进行验证;在检测到含有HBsAg的23例胎盘组织中，我们分别选取了7例、8例和10例胎盘组织，采用免疫荧光双标记方法结合激光共聚焦显微镜扫描技术，分别对HBsAg山AnV、HBsAg/Fe丫Rlll、HBsAg/C3e在胎盘的分布及两两是否具有共存现象进行了检测。 结果:(l)ELIsA法检测母血HssAg和HBe^g及新生儿HBsAg结果证实，39例产妇血清HBsAg均为阳性，其中5例产妇血清HBeAg阳性;39例新生儿中血清HBsAg阳性两例，其oD值分别为1.41和1.46，初步证实发生了宫内感染，宫内感染率为5.13% (2/39): (2)胎盘组织HBsAg筛检结果:39例血清学HBsAg阳性孕妇娩出的胎盘组织中，检测出含HBsAg的胎盘共23例，总阳性率为58.97%。阳性信号可位于母面蜕膜细胞，占48.71%(19/39)、滋养层细胞38.46%(15/39)、间质细胞53.85%(21/39)和胎儿绒毛毛细血管内皮细胞33.33%(13/39)，主要位于这些细胞的胞浆中，其余16例胎盘组织中未见到明确的阳性信号。在发生了胎儿宫内感染的两例胎盘组织中，在母面蜕膜细胞、滋养层细胞、间质细胞和胎儿绒毛毛细血管内皮细胞等各层胎盘细胞中均检测到了HBsAg;我们还就胎盘各层细胞HBV感染与宫内感染的关系进行了病例对照分析，结果仅发现胎儿绒毛毛细血管内皮细胞与HBV宫内传播有一定的联系(P=0.040)，其余各层细胞感染与HBV宫内传播的关系无统计学意义(P>0.05)。 (3)拟功V研究结果:在39例血清学HBsAg阳性和4例血清学HBsAg阴性孕妇娩出的胎盘组织中均可检测到hAnV，在筛检出含有HBsAg(包括发生宫内感染和未发生宫内感染)的23例胎盘和不含HBsAg的16例胎盘及血清学HBsAg阴性的4例胎盘组织中，均在胎盘绒毛滋养层细胞、间质细胞和胎儿绒