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第一部分含药血清的制备及药敏实验
目的：观察复方清热颗粒剂(Compound Qinre Drug Granules，QRKL)、复方清热颗粒剂含药血清(medicine serum)、空白血清(blank serum)、万古霉素、头孢呋辛单用及联合应用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin—Resistant Staphylococcus aureus，MRSA)的体外抗菌作用。
方法：采用腹腔注射MRSA标准株ATCC43300建立急性耐药菌腹腔感染兔动物模型，成模后即用复方清热颗粒剂22g/kg/d，每日分2次灌胃给药，连续共5天，于第5天末次灌胃给药后60min无菌心脏取血，留取含药血清、空白血清。琼脂对倍稀释法测QRKL、含药血清、空白血清、万古霉素、头孢呋辛单用及联合应用对MRSA ATCC43300及15株MRSA临床菌株的最低抑菌浓度(minimal inlubitory concentration，MIC)及计算部分抑菌指数(Fractional inhibitory concentration，FIC)。
结果：QRKL对ATCC43300的MIC为10.00mg/ml，对16株MRSA MICso及MIC90均为5.00 mg/ml。含药血清的MIC值未测出。单用万古霉素对MRSA的MIC50为0.50ug/ml、MIC90为1.00ug/ml，联用QRKL后MIC90降为0.50ug/ml。QRKL联用万古霉素能增强万古霉素对MRSA的杀菌作用，MIC比单用万古霉素时下降(P<0.01)，FIC多呈无关作用。单用头孢呋辛对MRSA的MIC50为256.00ug/ml，MIC90为512.00ug/ml，联用QRKL后MIC90降为256.00ug/ml，QRKL与头孢呋辛联用能增强头孢呋辛对MRSA的杀菌作用，MIC比单用头孢呋辛下降(P<0.01)，FIC多呈无关作用。万古霉素联用含药血清后MIC90降为256.00ug/ml，MIC较单用万古霉素下降(P<0.05)。头孢呋辛联用含药血清MIC与单用头孢呋辛无明显差异(P>0.05)。空白血清联用万古霉素、头孢呋辛与万古霉素、头孢呋辛单用相比均无差异(P均>0.05)。
结论：复方清热颗粒剂对MRSA有一定抑菌作用，弱于万古霉素及头孢呋辛，但复方清热颗粒剂与其联用可提高其对MRSA的杀灭作用。复方清热颗粒剂与万古霉素联用可减少其剂量，减轻其副作用，有望成为治疗MRSA感染的辅助用药，为MRSA感染的患者提供一治疗新思路。
第二部分PBP2a含量测定及复方清热颗粒对其表达的影响
目的：观察QRKL、含药血清、万古霉素、头孢呋辛单用及联合应用MRSA细胞膜青霉素结合蛋白2a(penicilin bingding protein2a，PBP2a)相对含量的变化。
方法：分组：A：西药组B： QRKL+西药组，C：含药血清+西药组，D：空白血清+西药组。按照各组西药亚抑菌浓度挑取相应浓度MH琼脂培养皿中单个菌落，于改良LB肉汤增菌，超声裂解提取细菌膜蛋白行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，紫外凝胶成像仪分析电泳凝胶中目的蛋白的相对含量。结果：QRKL联用万古霉素后PBP2a的相对含量较单用万古霉素下降(P<0.01)，联用头孢呋辛PBP2a的相对含量无变化(P>0.05)。含药血清联用万古霉素后PBP2a的相对含量较单用万古霉素降低(P<0.05)，联用头孢呋辛PBP2a的相对含量与单用头孢呋辛无差异(P均>0.05)。万古霉素、头孢呋辛分别联用QRKL、含药血清各组PBP2a的相对含量与其MIC无明显相关性(P均>0.05)。
结论： QRKL、含药血清分别联用万古霉素均后能降低PBP2a的相对含量，但各组PBP2a的相对含量与其MIC无线性相关，提示PBP2a参与影响万古霉素对MRSA的MIC，但尚有其他重要耐药机制参与。QRKL、含药血清分别联用头孢呋辛对PBP2a的表达无影响，且各组PBP2a的相对含量与其MIC无线性相关，PBP2a含量多少与MRSA对β—内酰胺类抗生素的耐药性强弱无关。