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目的:探讨Ⅲ型磷脂酰肌醇3-磷酸5-激酶（Phosphatidylinositol 3-phosphate 5-kinase type III,PIKfyve）在血管内皮损伤后内膜过度增生中的作用;研究PIKfyve是否在小鼠血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）的增殖和迁移过程中发挥作用,并初步探讨其作用的可能机制。方法:1.体内实验:为探索PIKfyve在血管内皮损伤后内膜增生中的作用,通过机械损伤颈动脉内皮法构建内膜增生模型,将雄性野生型C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、假手术+YM201636组、颈动脉内皮损伤组、颈动脉内皮损伤+YM201636组。造模后按分组腹腔注射生理盐水或YM201636（2mg/kg/d）,持续15天,造模28天后H&E染色检测颈动脉内膜增生程度;采用免疫组化染色检测颈动脉内膜的细胞增殖情况;q RT-PCR及Western blot法检测颈动脉PIKfyve的表达水平,q RT-PCR检测VSMC表型转换标志物分子的表达变化。2.体外实验:酶消化法分离并培养C57BL/6J小鼠原代血管平滑肌细胞,用血小板源性生长因子（Platelet-derived growth factor,PDGF）-BB干预VSMC诱导增殖和迁移,用si RNA沉默PIKfyve的表达,用PIKfyve抑制剂YM201636抑制PIKfyve活性,用胰岛素恢复哺乳动物雷帕霉素复合物1（Mammalian target of rapamycin complex 1,m TORC1）活性。采用CCK-8,Ki-67免疫荧光染色检测VSMC增殖,划痕实验检测VSMC迁移,q RT-PCR和Western blot检测PIKfyve、S6核糖体蛋白（Ribosomal protein S6,S6）、磷酸化（Phospho,p）-S6Ser235/236、4E结合蛋白1（4E binding protein 1,4EBP1）、p-4EBP1Thr37/46的表达水平变化。结果:1.与假手术组相比,小鼠颈动脉内皮损伤后内膜/中膜比值和Ki-67阳性细胞率增加,PIKfyve的表达增加。应用YM201636抑制PIKfyve活性后,可降低颈动脉内皮损伤后内膜/中膜面积比值,免疫组化结果显示YM201636减少内皮损伤后增生内膜的Ki-67阳性细胞率;YM201636逆转血管损伤后降低的α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）,钙调蛋白（Calponin）,平滑肌肌球蛋白重链（SM-myosin heavy chain,SM-MHC）的m RNA水平。2.在体外实验中,与溶剂对照组相比,PDGF-BB组VSMC细胞增殖活力增加、Ki-67阳性细胞率增加、迁移速率增加;q RT-PCR及Western blot结果显示PDGF-BB组小鼠VSMC的PIKfyve表达水平增加。沉默PIKfyve表达后,抑制了PDGF-BB诱导的细胞活力和Ki-67阳性细胞率增高;与此一致,YM201636抑制PIKfyve活性后,也可降低细胞增殖活力和Ki-67阳性细胞率;敲低PIKfyve表达或降低其活性均显著抑制PDGF-BB诱导后的增加的细胞迁移速率。敲低PIKfyve表达或降低其活性抑制了S6和4EBP1的磷酸化水平,胰岛素的干预恢复S6和4EBP1的磷酸化水平;胰岛素恢复m TORC1活性后,逆转了PIKfyve敲低或失活对VSMC Ki-67阳性细胞率和细胞迁移速率的抑制作用。结论:1.血管内皮损伤后PIKfyve表达增加,抑制PIKfyve活性减轻血管内皮损伤后的内膜增生。2.PIKfyve可能通过调节mTORC1活性,调控血管平滑肌细胞的增殖、迁移,从而在血管内皮损伤后内膜过度增生中发挥作用。