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H7N9禽流感病毒表面基因来自野禽H7和N9亚型病毒,内部基因来自家禽H9N2亚型病毒。自2013年出现了第一例人感染H7N9禽流感病毒后,目前我国已有27个省市、自治区和特别行政区确诊发现有人感染H7N9禽流感病毒病例,并且感染病例不断增加。受H7N9禽流感的冲击,我国大部分地区的家禽养殖业遭遇重创,经济损失严重。H7N9流感病毒的流行极大地威胁着人类的健康和家禽养殖业的发展。当流感病毒侵入机体细胞后,宿主对流感病毒的清除依赖于自身炎性相关反应的发展,NLRP3炎性复合体及其上下游信号通路的激活在机体识别病毒并发动内源性免疫反应中发挥重要作用。NLRP3炎性复合体的激活诱导IL-1β、TNF-α等细胞因子和趋化因子产生,趋化免疫细胞迁移到感染部位对抗病毒,但细胞因子风暴也会导致机体产生严重的病理损伤。当机体感染H7N9禽流感病毒后NLRP3相关的炎性信号通路的调控机制仍不清楚,尤其是流感病毒PB2蛋白627位点发生突变后,病毒对机体NLRP3相关的炎性信号通路的调控有何影响,机体又如何调控细胞因子风暴带来的病理损伤,这些问题迫切需要我们去探究和解答。因此,本文研究了BALB/c小鼠分别感染H7N9禽流感病毒VK627毒株和其PB2蛋白627位点单一突变体rVK627E毒株后,肺组织的病理损伤及NLRP3信号通路相关基因RIP3、NLRP3、IL-1β、TNF-α、SLIT2和ROBO4的表达模式和组织学分布。研究结果如下:1.H7N9禽流感病毒VK627毒株和其PB2蛋白627位点单一突变体rVK627E毒株对BALB/c小鼠的致病性。观察记录接种不同毒株的两组小鼠在各个时间点的体重变化和死亡率,收集肺脏制作组织切片进行病理组织学观察。结果表明攻毒VK627毒株的小鼠在第2天开始出现体重下降,出现严重的肺泡壁弥漫性静脉充血、轻微的间质性肺炎和炎性细胞浸润,但没有出现死亡现象。而PB2蛋白627位点单一突变毒株rVK627E毒力较弱,攻毒组小鼠体重呈现上升的趋势,肺泡壁也只有轻微的局部静脉充血,没有死亡现象。2.H7N9禽流感病毒及其突变株感染对BALB/c小鼠肺组织NLRP3通路相关基因的表达与蛋白组织分布的影响。研究采用荧光定量PCR和免疫组化技术分别检测空白对照组和流感病毒攻毒组BALB/c小鼠肺组织内RIP3、N LRP3、IL-1β、TNF-α、SLIT2和ROBO4基因的表达及蛋白分布的变化。结果显示,与空白对照组相比,H7N9流感病毒感染小鼠RIP3、NLRP3、IL-1β和TNF-α表达水平显著上调,且VK627毒株攻毒组小鼠的基因表达量显著高于rVK627E毒株攻毒组小鼠,说明两株H7N9禽流感病毒感染不同程度地激活了NLRP3通路相关基因的表达,可能对促进肺组织病理损伤发挥重要作用。与VK627毒株攻毒组小鼠相比,在rVK627E攻毒组中,SLIT2和ROBO4的表达水平有显著上调的趋势,VK627毒株攻毒组小鼠的表达则受到抑制,这可能是rVK627E攻毒组小鼠抑制了间质性肺炎和炎性浸润发展的因素之一。H7N9禽流感病毒感染诱导小鼠的肺组织中出现病理学变化,RIP3、NLRP3、IL-1β、TNF-α、SLIT2和ROBO4在肺组织中均表现出细胞特异性分布,特别是在肺泡上皮细胞中都有表达。研究结果为进一步研究炎症反应的机制和H7N9流感病毒PB2中627位点的作用提供了基础数据。此外,SLIT2-ROBO4信号通路调节宿主血管系统对炎症的反应将为H7N9流感病毒感染提供了新的治疗方向。