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自HIV-1传入我国以来在我国的传播范围越来越广。在河南和湖北等省许多地区非法采供血活动,成为HIV-1在中国的流行的重要的传播渠道之一,通过有偿献血感染HIV-1的人群引起了社会各界的广泛关注。为揭示湖北省既往有偿献血人群中流行的HIV-1的遗传背景,作者在2005年1月~2006年6月采集了湖北省不同地区的103份HIV-1阳性人群的血样作为研究对象,分析湖北省经采供血感染HIV-1流行株的亚型特点和流行规律。通过对gag-RT序列的系统进化树分析,确定湖北省经采供血感染的HIV-1流行株属于泰国B’亚型,与河南省既往献血员中流行的HIV-1 B亚型密切相关。此外,除了B亚型,湖北既往献血员中还存在HIV-1 B亚型的感染,提示我国中部地区HIV-1流行亚型的复杂性,HIV-1感染已经开始从高危人群向一般人群传播扩散。
为了进一步揭示我国中部地区流行的HIV-1 B亚型毒株的基因特征,将分离到的HIV-1 B’亚型毒株05CNHB_ hp3进行PBMCs共培养,提取细胞基因组DNA,扩增病毒基因组3’端近全长序列,根据测序结果,设计引物扩增病毒基因组剩余5’端一相对短的片段序列,将两个克隆片段连接形成完整的HIV-1全长分子克隆。从系统进化树分析来看,分离的病毒株属于HIV-1 B’亚型。通过将病毒基因序列提交斯坦福大学的HIV耐药数据库(http//hivdb.stanford.edu/pages/algs/HIV--db.html)分析病毒可能的耐药突变。结果表明该病毒并不含有任何的耐药突变,分离的病毒是一株能较好体现药物使用前流行的HIV-1 B’病毒。本研究中提供的全长基因组信息将对针对我国中部地区有效的疫苗和耐药性研究和发展提供参考。
与湖北省HIV-1流行病学研究同时进行的HIV-1耐药基因型研究结果显示,HIV-1逆转录酶(RT) F214L突变在治疗人群和非治疗人群中的发生率有显著差异,本文以F214L突变为研究对象,从酶学水平检测其可能的耐药机理。将F214L及其它相关突变位点引入HIV-1 pNL4-3 RT中,利用原核表达载体pET32a在大肠杆菌AD494中表达并纯化了含有F214L及其它相关突变位点(M41L、L210W、T215Y、D67N、K70R、K219Q)的重组HIV-1 RT蛋白。3’端被AZT或d4T封闭的引物(25nt)与模板(38nt)退火后,加入重组RT酶、dNTP和ATP,通过核酸变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测随反应时间延长末端封闭物被删除后引物链延伸的情况,以此来判断F214L突变对RT删除引物末端封闭物能力的影响。单独含有F214L突变的RT引物末端解封闭能力与野生型RT相比没有明显改变,在TAM2(D67N/K70R/K219Q)类耐药突变的基础上加入F214L突变后,RT的引物末端解封闭能力增强,而F214L突变的引入并没有对含有TAMl(M41L/L210W/T215Y)类耐药突变RT引物末端解封闭能力产生明显影响,所以,F214L与TAM2类耐药突变具有协同作用,增强RT的核苷类逆转录酶抑制剂删除能力。