灭螺药物对钉螺和财鱼GOT酶活力及其蛋白表达的影响研究

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湖北钉螺是日本血吸虫的唯一中间宿主,药物灭螺能有效预控血吸虫病流行。NiC是WHO唯一指定、我国常用的化学灭螺药物,但存在水溶解度低、靶标/点的选择毒性差及价格昂贵等技术经济难点。因此,需要紧密结合预控血吸虫病的国家重大技术需求研发新型灭螺药物。本文以苯胺NiC和灭螺植物水溶性甾体皂甙/生物碱为供试药物,以钉螺和财鱼为靶标,探讨药物对其蛋白质表达和酶活力的影响,这为新型灭螺药物研发的先导物和特定靶点分选提供依据。1、钉螺软体和财鱼肝脏GOT酶催化最适条件的研究通过L25(56)实验及极/方差分析,测得钉螺软体/财鱼肝脏匀浆液GOT酶催化最适条件分别在酶液浓度0.2/0.4mg/mL、底物浓度5.0/5.0μmol/L、反应体系pH7.5/8.0、反应时间60/20min及反应温度45/45℃时,其转氨基速率最高。提示物种间GOT酶催化动力学不同。这为灭螺药物对其活性影响研究提供实验依据。2、灭螺药物温孵/浸泡对钉螺和财鱼的GOT酶活力影响2.1药物温孵离体对钉螺软体的GOT酶活力浓度效应:梯度质量数的NiC和吉祥草、黄果茄及盾叶薯蓣水提取物,分别与酶温孵20min,在其0.25、0.5、0.5及2.0mg/L的酶活力诱导率最高,分别达到19.3、23.7、18.9及11.52%,提示钉螺GOT酶对吉祥草甾体生物碱的敏感性最高。2.2 NiC温孵离体财鱼肝脏的GOT酶活力浓度效应:梯度质量数的NiC分别与酶温孵30min,0.125mg/L NiC诱导率高达39.94%。时间效应:0.25mg/L NiC与酶经时温孵,40min温孵酶活力诱导率高达44.86%。2.3 NiC染毒财鱼肝脏的GOT酶活力梯度质量的NiC浸泡染毒财鱼,1.5mg/L时财鱼死亡时间最短3.5h,GOT酶活力诱导率最大113.99%。提示NiC诱导GOT酶活力可能是其致死财鱼的靶点之一3、NiC染毒对财鱼肝脏蛋白质表达影响0.5mg/L NiC染毒财鱼48h,取肝脏,运用2-DE技术及PDQuest 8.0.1软件分离分析,筛选出处理组有10个蛋白表达上调。这为NiC毒鱼机制及新型灭螺药物可能作用的特定靶蛋白提供一定的依据。
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