曲霉多糖的提取及其抑菌活性研究

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糖类化合物又称碳水化合物,由植物通过光合作用合成,是自然界分布最广泛、数量最多的一类天然有机物,其与核酸、蛋白质一起并称为三大生命物质。近几十年来,随着糖生物学的深入发展,多糖作为重要的碳水化合物走进人们的视线。多糖在特种药物研究、功能性食品、食品添加剂及食品抗菌包装等方面有广阔的应用前景。本研究以红曲霉、米曲霉、黑曲霉三种曲霉菌作为实验对象,利用农副产品的一些下脚料如玉米粉、豆粕、麸皮等作为三种霉菌的固态发酵培养基。通过正交试验对曲霉多糖的超声波提取方法进行了优化,得到最佳的浸提条件;对曲霉粗多糖的几种脱蛋白方法进行比较,得出最优方法;对曲霉多糖进行质量鉴定;初步探究三种曲霉多糖的抑菌活性。主要试验结果如下:1.曲霉多糖含量的测定。采用苯酚-硫酸法进行多糖含量的测定,在波长为490nmm处测定吸光值。葡萄糖标准曲线的线性回归方程为:Y=3.8938x+0.1362,相关系数R2=0.9989(R2>0.95);2.曲霉多糖超声波提取工艺优化研究。试验得到曲霉多糖最佳超声提取条件如下:红曲霉在85℃,固液比1:30,超声功率450w时具有最大的多糖得率,可达到5.97%。米曲霉在85℃,固液比1:20,超声功率400w时具有最大的多糖得率,可达到6.98%。黑曲霉在75℃,固液比1:25,超声功率400w时具有最大的多糖得率,可达到5.69%。3.采用紫外光谱扫描所提各组分曲霉多糖。三种曲霉多糖的紫外光谱曲线都比较平滑,高效液相检测没有葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖等小分子杂质。在260nm和280nm处均未见明显的蛋白质和核酸吸收峰,表明提取得到的三种曲霉多糖中均不含或含极少量蛋白质、核酸及其它杂质,纯度较高。4.以蛋白去除率和多糖损失率为指标,比较Sevag法、三氯乙酸(TCA)法、木瓜蛋白酶-Sevag联用法脱除曲霉粗多糖蛋白的效果。结果表明木瓜蛋白酶-Sevag联用法为最佳,其中红曲霉脱蛋白率达89.41%,多糖损失率仅为17.62%;米曲霉脱蛋白率91.23%,多糖损失率为18.43%;黑曲霉脱蛋白率87.14%,多糖损失率为19.36%。5.本文对曲霉多糖的抑菌作用进行了初步研究。结果表明:三种曲霉多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和青霉都有一定的抑制作用;红曲霉的MIC值分别为金黄葡萄球菌6.0mg/mL,大肠杆菌3.0mg/mL,沙门氏菌12.0mg/mL,青霉6.0mg/mL;黑曲霉的MIC值分别为金黄葡萄球菌1.5mg/mL,大肠杆菌3.0mg/mL,沙门氏菌6.0mg/mL,青霉6.0mg/mL;米曲霉的MIC值分别为金黄葡萄球菌6.0mg/mL,大肠杆菌3.0mg/mL,沙门氏菌12.0mg/mL,青霉12.0mg/mL;对根霉具有微弱的抑制作用。三种曲霉多糖在不同条件下的抑菌作用具有一定的稳定性。
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