【摘 要】
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据WHO资料统计,到2000年全球约有3.5亿HBV携带者。其中,大约有5%-10%的成人和80%-90%的儿童成为慢性乙型肝炎(CHB)。慢性乙型肝炎的长期病程结局是肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌(
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据WHO资料统计,到2000年全球约有3.5亿HBV携带者。其中,大约有5%-10%的成人和80%-90%的儿童成为慢性乙型肝炎(CHB)。慢性乙型肝炎的长期病程结局是肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌(HCC)。基因疫苗具备可高效持久诱导保护性免疫、安全、稳定、价格低廉、易于接种等特点,弥补了减毒活疫苗/灭活疫苗和亚单位疫苗存在的这样或那样的不足,但其诱导免疫反应的效率相对较低,尤其是对于大的动物种系和人类,这削弱了它们的实际应用。提高基因疫苗的效果,在低剂量基因疫苗的情况下诱导强有力的免疫应答,成为疫苗设计者的目标。至今为止,要达到这样的目标,一般有以下三个方案:1、修饰载体以增强抗原的表达;2、增加疫苗DNA的转运;3、辅佐剂的使用;我们的目标主要定位在了基因的转运上。在本论文中,我们提出了用体内电转染的方法,增强HBV基因疫苗的效果。同时我们也考察了prime-boost策略用作增强免疫应答的有效性和安全性。我们选择了HBV preS2 +S和S基因片段作为DNA疫苗的靶基因,应用分子克隆技术构建了能够表达HBV中蛋白基因的真核表达质粒pVAX1MS;能够表达HBV小蛋白的真核表达质粒pVR1012/HBs以及重组MVA病毒载体疫苗。应用pVAX1MS对Balb/C小鼠用体内电转染方法进行免疫,观察DNA疫苗剂量、免疫注射途径、体内电转染所使用的电压等因素对免疫效果的影响;应用真核表达质粒pVR1012/HBs对HBV转基因鼠进行初免(priming),然后用重组MVA病毒载体进行增强免疫(boost),通过检测鼠血清中表面抗原、表面抗体的浓度,HBV DNA滴度,转氨酶的变化,肝脏病理切片来整体衡量疫苗的治疗作用以及疫苗对肝脏带来的损伤;通过细胞免疫CTL的检测研究该免疫策略发挥作用的机制。
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