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背景女性患者生殖系统恶性肿瘤的发病率逐年攀升,其中占第一位的是子宫颈癌[1]。研究表明人类乳头状瘤病毒(Human Papilloma Virus,HPV)感染是罹患子宫颈癌的高危因素,而中科院附属肿瘤研究所流调显示在我国城市和农村地区HPV病毒携带率分别占其人口总数的15.2%和14.6%,这意味着我国对宫颈癌的防治应引起足够重视[2]。目前宫颈癌的治疗方案主要依靠手术和放化疗,而手术的创伤性、放射治疗对机体造成的永久性损害、化疗药物的毒副反应局限了其应用范围。近年来由于我国传统医学的不断发展,中药治疗以疗效高及毒副作用少等为特点日渐成为肿瘤研究的热点之一[39];蓝萼香茶菜属于唇形科植物,在我国民间很常见,已有研究表明其对多种肿瘤细胞的生长均具有抑制作用[40];其活性成分主要是二萜类和黄酮类,蓝萼甲素(Glaucocalyxin A,GLA)和蓝萼乙素(Glaucocalyxin B,GLB)是从香茶菜中提取的二萜化合物。研究表明GLB对多种肿瘤细胞生长具有抑制作用[7],例如:对肺腺癌AGZY细胞、HL-60白血病细胞、人视网膜母细胞瘤Rb细胞的抑制作用等[15-17];本课题组前期研究表明GLB可以抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞的增殖,而动物实验研究尚未有相关报道。目的在裸鼠皮下构建子宫颈癌HeLa及SiHa细胞的体内移植瘤,探讨不同浓度的蓝萼乙素对宫颈癌裸鼠体内移植瘤的抑制作用及机理,为其应用于临床提供理论基础。方法将体外培养的Hela、SiHa细胞分别移植至裸鼠右大腿根部背侧皮下,建立两种裸鼠移植瘤模型;待移植瘤体积约为0.1cm3时,于第10天将SiHa组随机分为4组,于第14天将Hela组分为4组,分别是生理盐水组、10%乙醇溶剂组、GLB低剂量组和高剂量组,每组5只;经腹腔注射给药,HeLa组给予生理盐水0.4ml/只、10%乙醇0.4ml/只、GLB0.15umol/g 0.4ml/只和0.20umol/g 0.4ml/只,隔日1次,共20天;SiHa组给予生理盐水0.4ml/只、10%乙醇0.4ml/只、GLB0.18umol/g 0.4ml/只和0.24umol/g 0.4ml/只,隔日1次,共20天。腹腔注射给药的同时,隔天用标准体重秤称量体重并做好记录,每隔2天用游标卡尺精确测量移植瘤的最大短径和长径,至少测量两次取平均值。给药结束后处死裸鼠前,眼球取血,测生化指标和肿瘤标志物,观察各组模型鼠生化指标和肿瘤标志物的变化;进行移植瘤的体积生长抑制试验观察各组移植瘤体积随时间的变化,组织形态学上表现为组织病理切片后的HE染色的变化[13];免疫组化法移植瘤组织中张力蛋白同源在10号染色体有缺失的磷酸酶基因(Phosphatase and tensin ho-molog deleted from chromosome 10,PTEN)、自噬关键调控因子Beclin1,微管相关蛋白3(Microtubule associated protein I light chain 3,LC-3)的表达变化,Western-blot法进一步检验相关蛋白变化。移植瘤生长曲线使用Graphpad软件绘制,各组间瘤重、处理前后瘤体积变化、肿瘤标记物等计量数据以均数±标准差(sx±)表示,应用SPSS19.0统计软件分析,多组间比较采用单因素方差分析,差异有统计学意义的组间两两比较采用LSD法进行比较,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1.裸鼠成瘤率为100%;裸鼠处死后,GLB处理组肿瘤标志物较对照组(生理盐水及10%乙醇组)降低,差异有统计学意义(P<0.05);GLB处理组和对照组生化指标比较差异无统计学意义(P>0.05);GLB处理组的移植瘤体积均明显小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.HE染色显示:GLB处理组移植瘤组织出现凋亡、坏死改变;免疫组化法、Western-blot法结果示:GLB处理组的肿瘤组织PTEN、Beclin 1蛋白表达水平及LC3II/I比例较对照组明显升高。结论1.蓝萼乙素可以抑制人宫颈癌HeLa、SiHa细胞裸鼠体内皮下移植瘤的生长,具有浓度依赖性;蓝萼乙素可明显降低实验动物的肿瘤标志物,具有浓度依赖性;蓝萼乙素在一定剂量范围内可诱导裸鼠体内移植瘤细胞发生自噬、凋亡。2.蓝萼乙素抑制宫颈癌细胞生长的作用可能与上调PTEN和Beclin1及LC3蛋白的表达有关。