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目的研究生长激素释放肽-6(GHRP-6)与其受体(GHS-R)结合后细胞内的信号传导机制,检测信号传导通路中发挥主要作用的蛋白激酶C(PKC)亚型。方法首先检测GHRP-6对大鼠垂体GH腺瘤细胞系GH3细胞生长激素(GH)分泌和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化的调节作用。然后对GHRP-6诱导激活的PKC亚型进行初步筛选：应用PKC广谱激动剂佛波醇酯(PMA)和两种PKC抑制剂(Go6983和rottlerin)干预GH3细胞。对初步筛选出的PKC亚型进行RNA干扰,沉默其表达,以确定该亚型的作用：根据Genebank数据库提供的基因核苷酸序列设计干扰序列,由生物公司帮助合成；利用lipo2000作为载体转染GH3细胞。转染后,应用Western blot检测该亚型的蛋白表达,以确定转染效率。同时检测基因沉默该亚型后,GHRP-6对GH分泌和CREB磷酸化的调节作用的变化。并检测GHRP-6作用后该亚型的活性。结果GHRP-6诱导GH分泌呈时间和浓度依赖性(P<0.05),并且可以增强生长激素释放激素(GHRH)的作用(P<0.05)。GHRP-6诱导CREB磷酸化呈时间依赖性。抑制PKC,特别是基因沉默PKCσ减弱了GHRP-6诱导的CREB磷酸化和GH分泌。并且,GHRP-6可以诱导PKCσ活化。结论PKC(特别是PKCσ)参与了GHRP-6诱导的CREB磷酸化和GH分泌,将PKC信号通路和PKA信号通路连接了起来。目的研究生长激素释放肽-6(GHRP-6)与其受体(GHS-R)结合后细胞内的信号传导机制,检测信号传导通路中PKC的下游分子。方法首先利用腺苷酸环化酶(AC)的抑制剂MDL-12,330A以不同浓度干预GH3细胞2小时,然后给予GHRP-6(100nM)刺激细胞。应用cAMP-酶联免疫吸附试验(cAMP-ELISA)检测AC被抑制后cAMP的生成水平。同时应用GH-ELISA检测AC被抑制后,GHRP-6诱导的GH分泌水平的变化,应用Western blot检测AC被抑制后,GHRP-6诱导的CREB磷酸化水平的变化。结果MDL-12,330A可以明显抑制基础的和GHRP-6诱导的cAMP生成(P＜0.01)；AC被MDL-12,330A抑制后,GHRP-6诱导的GH分泌水平和CREB磷酸化水平明显减弱(P<0.01)。结论GHRP-6诱导垂体生长激素腺瘤生长激素分泌和CREB磷酸化需依赖腺苷酸环化酶的活化。目的检测一氧化氮(nitric oxide,NO)对ghrelin诱导的大鼠GH3细胞的生长激素(GH)分泌和细胞增殖的影响,探讨NO的作用机制。方法首先检测ghrelin在不同浓度和不同作用时间时对GH3细胞GH分泌和增殖的影响；然后预先用SNAP (NO的供体)和NAME (NO合成酶的抑制剂)干预细胞后,检测NO对ghrelin诱导的GH分泌和细胞增殖的影响；用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测GH水平,MTT法检测细胞增殖,Western免疫印迹法细胞内信号通路蛋白的活性变化。结果ghrelin刺激GH3细胞分泌GH呈时间和浓度依赖性(P<0.01),ghrelin明显刺激GH3细胞的增殖(P<0.05);SNAP可抑制基础的和ghrelin刺激的GH分泌(P＜0.05),对细胞增殖也有明显影响(P<0.05),而NAME对GH的分泌和细胞增殖无影响；ghrelin可诱导细胞外信号调节激酶(ERK)的活化,SNAP可以抑制这种效应。结论ghrelin促进GH3细胞GH分泌和细胞增殖,NO可以抑制些种效应,其机制可能阻断了ghrelin激活的ERK信号通路。