论文部分内容阅读
背景子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs),简称内异症,是指具有活性的子宫内膜组织(腺体和间质)异位到子宫腔以外的部位生长,出现反复周期性出血,并形成疾病,出现症状等。内异症在育龄期女性中的发病率约为10%-15%,主要临床症状包括疼痛和不孕。对于内异症的病因,国内外学者提出了多种假说,包括经血逆流学说、体腔上皮化生学说、血行或淋巴转移学说等,但其发病机制目前仍不明确,严重桎梏其临床治疗。因而,进一步探究内异症的发病机制,在各发病因素中寻找关键且不良反应小的治疗靶点,从而有效提高其治疗效果迫在眉睫。CXC型趋化因子配体16(CXC chemokine ligand 16,CXCL16)是新近发现的趋化因子,属于趋化因子CXC家族,有膜结合型和分泌型两种存在形式。CXCL16同时具有CC家族和CX3C家族趋化因子的特征,包含跨膜结构区和黏蛋白样结构。趋化因子受体CXCR6是CXCL16的唯一受体,也称孤儿受体Benzo或STRL33受体,是一个七次跨膜的G蛋白耦联受体。CXCL16/CXCR6趋化因子轴具有多种生物学功能,既往对其在人类疾病中的报道多集中在动脉粥样硬化、风湿免疫、肝炎、等免疫及炎症相关疾病中。近年来,CXCL16/CXCR6在人体各系统发生的恶性肿瘤中的异常表达逐渐被人们所认识。CXCL16/CXCR6在多种肿瘤中表达显著增高,包括前列腺癌、乳腺癌、肺癌和结直肠癌等,并与肿瘤的恶性程度呈正相关性。进一步研究发现CXCL16/CXCR6的表达和功能存在一定的组织特异性,在不同肿瘤细胞中通过表观遗传学精细调控,参与细胞迁徙转移等恶性生物学行为,在肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。子宫内膜异位症虽然是良性病变,但具有类似恶性肿瘤的生物学行为,如侵袭、远处转移和复发等。前期有研究表明,CXCL16/CXCR6在卵巢异位子宫内膜组织中有表达,CXCL16在异位子宫内膜间质细胞中可诱导IL-8的产生,提示其可能参与内异症炎症反应的调节。然而,CXCL16/CXCR6轴在内异症发病中的具体机制仍不清楚。本研究的目的是检测和比较分析CXCL16/CXCR6在非内异症女性和卵巢型内异症患者体内的表达情况,研究CXCL16/CXCR6对异位内膜间质细胞增殖、细胞迁移和侵袭的作用,进一步探讨其在内异症中的调节机制及相关的细胞分子机制,为临床内异症的治疗提供新思路。目的明确CXCL16/CXCR6趋化因子轴对子宫内膜间质细胞迁徙增殖的影响及相关信号通路分子,探索可能的内异症临床干预靶点。材料与方法采集非内异症女性及内异症患者术前血清,通过ELISA实验检测两组血清中分泌型CXCL16的表达水平;收集非内异女性的子宫内膜标本与内异症患者的卵巢异位内膜标本,用RT-qPCR和Western Blot检测两组样本CXCL16/CXCR6的mRNA和蛋白表达情况;用临床取材新鲜的卵巢异位内膜组织培养原代细胞,分离提纯出异位子宫内膜间质细胞(EESCs),免疫荧光检测间质细胞的纯度;构建小干扰RNA(siRNA-CXCR6),瞬时转染EESCs来抑制CXCR6的表达,CCK8法检测处理后细胞增殖能力的改变,Transwell法检测细胞迁移侵袭的活性,Western Blot检测下游ERK信号通路的活化情况;TNF-α体外干预处理EESCs,分别采用ELISA和Western Blot检测干预组和非干预组EESCs培养上清分泌型CXCL16的表达和CXCL16/CXCR6的表达情况。结果1.分泌型CXCL16和膜结合型CXCL16在内异症患者血清中及异位内膜组织中表达水平显著高于非内异组,而CXCR6在两组间表达无显著差异。2.成功分离纯化和培养原代异位内膜间质细胞,细胞纯度高,呈长梭形,状态稳定,可传代。3.siRNA-CXCR6转染抑制CXCR6的表达后,EESCs增殖能力不变,细胞迁移及侵袭能力均下降。4.EESCs抑制CXCR6表达后,ERK信号通路的磷酸化水平下降。5.TNF-α体外干预处理EESCs后,分泌型CXCL16和膜结合型CXCL16表达水平升高,而CXCR6表达无明显变化。结论1.CXCL16/CXCR6趋化因子轴的异常调控和内异症的发生发展可能有一定相关性。2.CXCL16/CXCR6可能通过ERK信号通路影响内异症患者异位内膜间质细胞(EESCs)的迁移侵袭能力。3.TNF-α可能介导内异症患者体内CXCL16的异常表达。