【摘 要】
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猪胚胎在附植期间,胚胎与母体之间有着密切的信号交流,很多调节因子在妊娠识别过程中发生复杂而协调的变化从而促进胚胎、子宫内膜和子宫腔微环境发生同步反应。胚胎与母体之间的信号交流需要子宫腔液中的相关因子进行信号传递。近年来,外泌体作为细胞间的交流媒介,在生殖系统的微环境中发挥着重要作用。但猪妊娠早期子宫腔液中是否存在外泌体及其蛋白的种类还未见报道。因此分析鉴定猪妊娠早期子宫腔液外泌体的成分及功能为发现
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猪胚胎在附植期间,胚胎与母体之间有着密切的信号交流,很多调节因子在妊娠识别过程中发生复杂而协调的变化从而促进胚胎、子宫内膜和子宫腔微环境发生同步反应。胚胎与母体之间的信号交流需要子宫腔液中的相关因子进行信号传递。近年来,外泌体作为细胞间的交流媒介,在生殖系统的微环境中发挥着重要作用。但猪妊娠早期子宫腔液中是否存在外泌体及其蛋白的种类还未见报道。因此分析鉴定猪妊娠早期子宫腔液外泌体的成分及功能为发现调控猪胚胎附植的重要因子奠定基础,为提高胚胎附植成功率提供新的思路。本研究通过分离鉴定子宫腔液外泌体,并通过i TRAQ定量蛋白组学方法对纯种大白母猪发情9天、妊娠9天、妊娠12天和妊娠15天四个时期的子宫腔液外泌体蛋白进行定量和分析,得到以下结果:（1）本研究通过透射电镜结果表明子宫腔液外泌体为膜状囊泡,WB鉴定结果表明外泌体标志物CD9和CD63呈阳性表达,粒径分析子宫腔液来源的外泌体直径在100-150nm之间。（2）iTRAQ蛋白质组学定量生物信息分析表明发情9天与妊娠9天的子宫腔液外泌体蛋白表达模式相近,妊娠12天和妊娠15天的子宫腔液外泌体蛋白表达模式相近。（3）Western Blot鉴定结果表明在四个时期子宫腔液外泌体中均含有ACP5和MEP1B蛋白质。四个时期的子宫内膜切片的免疫组化结果表明ACP5和MEP1B蛋白在猪子宫内膜和猪胚胎滋养层表面表达。（4）MEP1B蛋白在发情9天、妊娠9天、妊娠12天和妊娠15天的猪子宫内膜中均有表达并且随妊娠时间的增加而增加,并且MEP1B蛋白的干扰RNA对猪子宫内膜细胞和胚胎滋养层细胞的活性具有抑制作用。综上所述,猪子宫腔液中存在外泌体,并且外泌体蛋白在发情期与妊娠早期不同时间段的表达有差异,MEP1B蛋白很有可能与胚胎附植有关。
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