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目的:探索Toll样受体4（Toll like receptor 4,TLR4）信号在碱烧伤诱导的角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV）中的作用及其相关分子机制。方法:角膜碱烧伤模型分别采用遗传背景为C57BL/10Sc N的8周龄大小雄性野生型（wild type,WT）小鼠和相同遗传背景和周龄的雄性TLR4基因敲除(TLR4knockout,TLR4-/-)小鼠。研究分为三个部分。实验一:对照组（NC组）和碱烧伤组（AB组）,每组15只小鼠;实验二:野生型对照组（WT-NC组）,野生型碱烧伤组（WT-AB组）,TLR4基因敲除对照组(TLR4-/--NC组)和TLR4基因敲除碱烧伤组(TLR4-/--AB组),每组15只;实验三:对照组（NC组）,碱烧伤组（AB组）和Tak242给药组（Tak242-AB组）,每组15只小鼠。用浓度为1.25%阿佛丁按0.2 m L/10 g的剂量以腹腔注射的方式进行麻醉。用直径为2 mm的圆形滤纸片蘸取浓度为1 M的Na OH贴附在左眼进行碱烧伤40 s,随后立刻用20m L的生理盐水冲洗左眼清除残余的Na OH溶液。之后进行常规喂养。采用裂隙灯显微镜对角膜新生血管的生长情况进行观察,并采集碱烧伤模型建立的第0,3,7,14天的图像,新生血管覆盖角膜区域的百分比用Robert公式进行统计计算。在第14天使用阿佛丁麻醉后处死所有小鼠,摘取左眼。H＆E染色评估角膜厚度变化;免疫组化、Western blot、RT-PCR检测VEGF-A、My D88、NF-κB的表达;RT-PCR检测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达。此外,用TLR4特异性抑制剂瑞莎托维（Tak242）给药治疗碱烧伤的小鼠角膜。裂隙灯显微镜检查角膜新生血管;免疫组化、Western blot、RT-PCR检测VEGF-A、My D88、NF-κB的表达;RT-PCR检测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达。结果:1、角膜碱烧伤后,角膜新生血管最初从角膜边缘开始生长,逐渐侵入角膜中央;在第3天、第7天和第14天新生血管覆盖面积随碱烧伤时间逐渐增加;H＆E染色结果显示碱烧伤后角膜基质厚度显著增加;RT-PCR和Western blot结果表明碱烧伤后角膜内TLR4表达水平显著上升。2、TLR4基因敲除能显著减少碱烧伤诱导的角膜新生血管覆盖面积,角膜基质厚度变薄;TLR4-/-小鼠角膜中TLR4下游信号My D88和NF-κB的m RNA表达下降,VEGF-A,炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的m RNA表达也显著下降。Western blot结果表明,角膜碱烧伤后,TLR4基因敲除降低了My D88、NF-κB和VEGF-A蛋白的表达水平;在免疫组化结果显示TLR4基因敲除减弱了VEGF-A的免疫阳性水平。但是,碱烧伤后TLR4-/-小鼠角膜中TRIF依赖性通路TRIF和IRF3的m RNA表达与WT小鼠相比无明显变化3、与AB组相比,Tak242治疗的小鼠,降低了碱烧伤诱导的角膜新生血管覆盖面积和角膜基质的厚度;并且,Tak242处理的小鼠My D88、NF-κB、VEGF-A和炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA表达水平也降低;在Western blot和免疫组化得到了TLR4基因敲除的相似的实验结果。但是在使用Tak242治疗的小鼠角膜中TLR4、TRIF和IRF3的m RNA表达水平无显著变化。结论:碱烧伤激活角膜中TLR4信号和相关炎症因子。抑制TLR4可减轻AB诱导的CNV,并抑制My D88、NF-κB、VEGF-A和炎症因子的表达。因此,TLR4以My D88依赖性介导碱烧伤诱导的角膜血管研究结果可为CNV和血管生成性疾病的临床治疗提供理论依据。