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目的 近年发现ET可导致胰腺微循环障碍，它与急性胰腺炎的病理生理发展和死亡率密切相关，本实验研究旨在观察ANP时ET在腔静脉血和门静脉血中的浓度变化、ET免疫组化染色、病理切片以及半定量RT-PCR检测ET-3 mRNA基因水平的表达，并比较使用多巴胺改善胰腺微循环时，上述各指标的变化。方法 1、动物分组：将108只大鼠随机分成：假手术组(A)、损伤对照组(B)、DA动脉给药组(C)和尾静脉给药组(D)。2、SAP模型制备：采用4.5％牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射建立大鼠ANP模型，并于1h、6h、24h分别处死大鼠采集尾静脉和下腔静脉、门静脉血液，取胰腺组织作免疫组化染色、半定量RT-PCR检测ET-3的mRNA表达水平以及病理切片检查和评分。3、各实验组血液标本ET浓度放射免疫检测：按ET放免试剂盒说明测定各管沉淀的放射性计数(cpm)。4、胰腺组织免疫组化染色：使用SABC法检测，显微镜观察并摄片。5、胰腺总RNA的提取：将胰腺标本从液氮中取出，立即加入变性剂RNAex Reagent，匀浆，按说明书加入异丙醇等试剂，所获得的RNA沉淀加入无RNA酶的水溶解RNA，测定各管吸光度(A)260nm及280nm波长之OD值，确定RNA的质量、浓度和纯度。6、ET-3 mRNA的RT-PCR反应：采用一步反应法完成RT-PCR反应，反应总体积201，依据设定的反应条件扩增30个循环。7、RNA和RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳，采昆明医学院博士学位论文中文摘要用图象自动捕获系统将电泳图象直接输入计算机储存，RT.PCR产物生成量采用琼脂糖凝胶电泳区带灰度值比较进行半定量分析。8、胰腺组织病理学评分:处死大鼠时在胰头、体、尾部各取一块组织进行光镜检查，按Kusske等[21的方法对水肿、炎症、出血、坏死分别进行评分。结果1、放免测定:损伤组大鼠外周血、门脉血和腔静脉血ET水平明显高于假手术组和给药组。2、免疫组化:损伤组内皮细胞ET染色光密度明显高于其余各组。3、胰腺总RNA的提取:与肝组织标本比较，胰腺总RNA降解稍多，但符合mRNA的半定量比较要求，得率在1 .8~2.0之间。4、ET-3 mRNA半定量RT一PCR:B组各时间段与A组比较，均有极显著差异，C组与B组同时间段比较有显著差异，除A组外，以6小时时，ET一3mRNA表达最强.5、损伤组胰腺病理学改变明显加重，动脉给药组比尾静脉给药组的病理损伤减轻。一结论ET能有效反映胰腺病变程度，检测门脉血ET比外周血更灵敏、准确，经腹主动脉给药比外周静脉注射更有效。免疫组化方法检测表明，ET定位于胰腺组织的血管内皮细胞.采取综合措施仍可从胰腺组织受到破坏的实验性胰腺炎大鼠的胰腺组织中提取到质量较为满意的RNA，ANP时，ET-3 mRNA的表达水平与胰腺损伤程度明显相关。