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毒死蜱(CPF)是一种世界范围内广泛使用的有机磷杀虫剂,其进入动物体内不仅会被一相解毒酶P450迅速氧化为更具毒性的氯吡硫磷一氧(CPO)或三氯吡啶酚(TCP),而且还能够引起细胞内氧胁迫。而二相解毒酶谷胱甘肽转移酶(GSTs)除了可以降解CPO、TCP以及CPF本身为无毒的产物,还具有过氧化物酶活性,因此在抗毒死蜱上起着重要的作用。但其抗毒死蜱的调控机制尚不清楚。本论文以农业重要害虫斜纹夜蛾为实验材料,用亚致死剂量(LC50)毒死蜱连续使用12代,研究斜纹夜蛾GSTs在敏感品系和处理多代虫中应答毒死蜱,以及在毒死蜱处理多代虫中表达上调的GST的作用和表达调控机理。结果如下: (1)通过转录组数据库获得并鉴定出37个斜纹夜蛾GST家族cDNA序列(包括实验室之前获得的8个来自中肠GSTs基因),其中含32个细胞质GSTs(分别为15个Epsilon、4个Delta、6个Sigma、3个Omega、2个Zeta、1个Theta和1个Unclassified类GSTs)和5个微粒体GSTs。 (2)用LC50毒死蜱对斜纹夜蛾连续处理12代,脂质过氧化终产物丙二醛含量增加;与敏感品系相比,有8个GSTs的mRNA表达水平上升,说明SlGSTs表达量的上升可能和毒死蜱反复使用导致的氧胁迫增加有关。 (3)对37个GSTs在敏感品系和毒死蜱处理多代虫中响应毒死蜱的表达情况进行分析,结果表明有8个GSTs在两种虫中都有不同程度的诱导表达上调,另外有4个GSTs只在毒死蜱处理多代虫中响应毒死蜱,说明毒死蜱处理多代虫比敏感品系需更多GSTs参与作用毒死蜱; (4)选取SlGSTe1为代表研究SlGSTs应答毒死蜱诱导的表达调控途径,结果表明CPF和CPO都能通过增加细胞氧胁迫,引起氧受体SlNrf2 mRNA表达量增加,启动Nrf2-ARE途径促进SlGSTe1的表达。同时还发现一个未知核蛋白在毒死蜱处理早期结合到SlGSTe1启动子-736--696未知反应元件上启动SlGSTe1的表达。 (5)选取SlGSTu1为代表研究SlGSTs在LC50毒死蜱处理多代虫中表达上调的调控机理,结果表明SlGSTu1在毒死蜱处理多代虫中的高表达是因为毒死蜱反复使用多代后导致体内有害过氧化物质增加,促使具有过氧化物酶活性功能的SlGSTu1表达上调,而不是启动子序列发生突变。而过氧化物的积累可以引起与抗氧化相关的转录因子Slc-Jun的mRNA表达量增加,进而启动c-Jun-AP-1途径调控SlGSTu1在毒死蜱处理多代虫中的高表达。 总结:斜纹夜蛾GSTs在抗LC50毒死蜱中的作用可分为两大类:一类是参与抵抗LC50毒死蜱处理多代虫中不断积累的氧伤害,c-Jun是其中一个重要调控因子;另一类是响应毒死蜱诱导而表达上调,进而起到降解毒死蜱和抗氧胁迫的作用,Nrf2是其中一个重要调控因子。