猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea, PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起的猪的肠道传染病,其主要特征是严重的肠炎、呕吐、腹泻及脱水。该病在世界范围内广泛分布,给养猪业造成了严重的经济损失。本研究通过RT-PCR分别克隆了PEDV CH/SHH/06株的M蛋白和N蛋白的基因,并克隆到pGEM-T载体进行测序。测序验证无误后,以构建的重组质粒pGEM-M为模板,PCR扩增截短的M基因（tM,295～678bp）并克隆到原核表达载体pET-30a和pGEX-6P-1上,构建重组质粒pET-30a-tM和pGEX-tM;从构建的重组质粒pGEM-N上将N基因切下来并连接到原核表达载体pET-30a上,构建重组质粒pET-30a-N。分别将这三种重组质粒转化感受态细胞BL21（DE3）,同时,以相应的空载体转化BL21（DE3）作为阴性对照。IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE分析显示,表达的M蛋白和N蛋白的分子量大小分别约为:15Ku(tM-Hi_s6)、40Ku（GST-tM）、56Ku(N-Hi_s6)。Western blot试验证明重组蛋白tM- Hi_s6、GST-tM和N-Hi_s6均能与兔抗PEDV阳性血清发生反应。分别以纯化的重组蛋白tM- Hi_s6和N-Hi_s6免疫BALB/c小鼠,通过常规杂交瘤技术获得一株稳定分泌抗M蛋白抗体的杂交瘤细胞和三株稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D4; 4G1、4H7、2G3。M蛋白MAb D4亚类为IgG2b,轻链为κ;N蛋白MAbs亚类均为IgG1,轻链均为κ。间接免疫荧光试验（IFA）表明D4、4H7和2G3均对接种PEDV的Vero E6细胞产生特异的免疫荧光。Western blot试验显示抗M蛋白MAb D4能识别天然的M蛋白,而三种抗N蛋白的MAbs均不与天然的N蛋白反应。通过对M蛋白和N蛋白进行一系列的截短表达,初步确定抗M蛋白MAb D4针对的抗原表位是“¹⁹³TGWAFYVR²⁰⁰”;抗N蛋白MAbs 4G1、4H7、2G3针对的抗原表位分别是“⁶⁰RMRRGERIEQPS⁷¹”、“¹⁴³ERDLKDIPEWRRIPKG¹⁵⁸”、“N蛋白第337aa～396aa”。为了精确确定M蛋白和N蛋白的抗原表位,本研究从已经初步鉴定出的表位序列的N端和C端逐个去除氨基酸来确定抗原表位的核心氨基酸。结果表明“¹⁹⁵WAFYVR²⁰⁰”、“⁶⁰RMRRGERIEQPS⁷¹”、“¹⁴⁸DIPEWRR¹⁵⁴”分别是MAbs D4、4G1、4H7所识别的表位的核心序列。同源性分析显示,M蛋白表位“¹⁹⁵WAFYVR²⁰⁰”和N蛋白表位“⁶⁰RMRRGERIEQPS⁷¹”是高度保守的,N蛋白表位“¹⁴⁸DIPEWRR154”则比较保守。Western blot试验证明M蛋白表位“195WAFYVR200”可以被猪抗PEDV阳性血清识别,而不与猪抗TGEV阳性血清反应。本研究确定了PEDV M蛋白和N蛋白上的抗原表位,为进一步阐明M蛋白和N蛋白的抗原结构及设计表位疫苗和鉴别诊断方法提供了有用信息。