放线菌A.pretiosum袢环丝裂霉素糖苷研究

来源 :中国科学院昆明植物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hyhlj
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本文研究了不同的培养方式与放线菌ATCC31565中袢环丝裂霉素糖苷产生的关系。证明固体培养时产生袢环丝裂霉素糖苷而同等条件液体培养则不产生此类化合物;这种区别是氧含量和渗透压共同作用的结果:肯定了固体发酵方式的重要性。对平板琼脂发酵条件下同时产生袢环丝裂霉素及其酰胺N-糖苷的猜测途径进行了讨论(见Fig.1.);以袢环丝裂霉素酰胺N-糖苷混合物为底物,采用提取自野生菌株的粗蛋白对是否存在酰胺N-糖苷水解酶作了初试,未得到预期结果。发展了对袢环丝裂霉素的TLC检测手段,提高了分辨率,以较为特别的方法成功的自放线菌A.pretiosum的asm19增强型突变菌株内分离鉴定了7个化合物(其中6个为新化合物,包括5个极为罕见的糖基发生氨甲酰基取代的酰胺N-糖苷Fig.2.1-5;一个鼠李糖糖苷)。最后还对放线菌A.pretiosum及其5个突变体——asml9增强型菌株、Δasm19、Δasm10.Δasm25以及Δasm21进行了液体、固体发酵方式的培养,比较研究了袢环丝裂霉素及其衍生物的异同;经TLC和ESI-LCMS分析,发现Δasm25及asm19增强菌株出现了N去甲基袢环丝裂霉素;Δasm19的产物与文献报导有区别。综合所有试验结果,对asm10、asm19和asm25的相互作用进行了讨论,提出有关asm21、asm19、asm10和asm25各基因间作用顺序和相互调控的假说。   本文作者试验中涉及的几个基因中,asm10、asm25的表达产物同时平行为袢环丝裂霉素后修饰最后一步;其中asm25还兼具对asm19基因的调控作用。从基因功能上来看,asm25可能是一个诱导型基因,在受到诱导时才执行表达功能,通常情况下则是一个调节基因;asm10则属于构成型基因,在放线菌A.pretiosum整个生命过程中都表达,并且执行其对18位酰胺N-甲基取代修饰功能。并且在Asm10、Asm19和Asm25三个表达产物中,Asm19的转化效率远高于Asm10与Asm25(Asm10的转化效率也略高于Asm25);为了避免浪费资源,出现Asm19的转化产物过剩,asm25对asm19的调节功能是限制asm19的表达,严格控制Asm19的转化效率。这种调节的严格性不是绝对的,因为微生物的变异性很大,且发酵时微生物个体扩增的具高产性,繁殖个体非常多,无法避免个别个体发生突变,基因的调节作用很弱或失效;在次生代谢上表现为极少量的非预期产物出现。
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