水溶性高分子聚合物聚乙烯醇(PVA)性能优良、化学性质稳定而用途广泛,PVA,因大量使用和不易降解,已经对生态环境造成污染。其降解微生物的筛选驯化和应用PVA降解菌对改善环境具有理论和实践意义。本研究以一株聚乙烯醇降解菌Bacillus amyloliquefaciens HK1为研究对象,通过菌株鉴定、生长降解条件优化、全基因组测序、基因敲除、基因体外表达等试验及数据分析,为该菌的开发利用和降解机理研究提供参考和依据,为生物降解PVA提供菌种资源。主要研究结果如下:(1)HK1在LB培养基上的菌落呈不规则形状,浅黄色蜡质,不透明,表面干燥有褶皱,菌落中部隆起,边缘呈锯齿状。从扫描电镜图中可以看到HK1的单个菌体形态为椭圆杆状,长度约为28μm,直径约为6μm。结合生理生化,菌落菌株形态,16S r DNA序列测序结果等可以确定HK1为解淀粉芽孢杆菌。(2)通过对不同抗生素对HK1菌株的致死浓度检测得,HK1菌株对四环素、氯霉素、盐酸壮观霉素有一定的抗性,致死浓度分别为700 mg/L、50 mg/L、50 mg/L。对青霉素、链霉素、红霉素、卡那霉素、庆大霉素、氨苄西林钠等均无抗性。(3)分别研究了p H、温度、初始PVA浓度和酵母粉浓度等条件对HK1降解PVA的影响。结果表明其最适p H、温度、初始PVA浓度和酵母粉浓度分别为8.0、30℃、1.0 g/L和2.0 g/L。(4)从全基因组测序信息中筛选出被预测为具有醌蛋白乙醇脱氢酶结构域的膜蛋白基因3057并对其进行原核表达。将基因连接于p ET-28a载体中构建表达载体,并转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。通过Western Blot验证3057基因已经表达。通过粗酶液试验证明3057基因体外表达产物有降解聚乙烯醇的活性。