PRMT2在乳腺癌细胞有氧糖酵解中的作用与机制研究

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目的探索蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase2,PRMT2)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231及SK-BR-3有氧糖酵解代谢途径中的作用与机制。方法以体外培养的乳腺癌细胞株MDA-MB-231及SK-BR-3株作为研究对象,将实验分为三组:无质粒转染的乳腺癌细胞株MDA-MB-231及SK-BR-3组为空白对照组(CON),pcDNA3.1(+)空载体转染的细胞组为阴性对照组(NC)以及pcDNA3.1(+)-PRMT2质粒转染的细胞组为PRMT2高表达组(PRMT2)。具体方法如下:1.通过荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法(western blot,WB)检测各组细胞中PRMT2的mRNA和蛋白表达水平。2.利用葡萄糖及乳酸检测试剂盒分别检测各组细胞的葡萄糖消耗量及乳酸积累量,初步确定PRMT2对乳腺癌细胞株MDA-MB-231及SK-BR-3有氧糖酵解的影响。3.通过荧光定量PCR和western blot检测各组细胞中糖酵解通路相关酶的mRNA和蛋白表达水平。4.通过双荧光素酶报告基因检测PRMT2对糖酵解关键酶PFKP和PKM2启动子活性的影响。结果1.荧光定量PCR和western blot结果显示:PcDNA3.1(+)-PRMT2质粒成功转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231及SK-BR-3,PRMT2mRNA及蛋白表达较转染pcDNA3.1(+)空载体的阴性对照组(NC)明显增加,差异具有统计学意义(P<0.0001)。2.葡萄糖消耗实验及乳酸积累实验结果显示:与NC组相比,PRMT2高表达的乳腺癌细胞株MDA-MB-231及SK-BR-3葡萄糖消耗量及乳酸积累量均增加,且具有统计学意义(P<0.001)。3.荧光定量PCR和western blot结果显示:与NC组相比,PRMT2高表达可增加PFKP、PKM2等糖酵解相关酶的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.荧光素酶报告基因检测结果显示:PRMT2基因高表达增强乳腺癌细胞糖酵解关键酶PFKP与PKM2的启动子活性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PRMT2能通过上调PFKP、PKM2等糖酵解相关酶的表达,从而促进乳腺癌细胞株MDA-MB-231及SK-BR-3有氧糖酵解。
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