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禽流感是目前影响世界养禽业的最严重的疫病。血凝素蛋白(HA)是禽流感病毒最重要的结构蛋白，占囊膜蛋白的90％，是诱导体液免疫的主要靶抗原，并且还能诱导细胞毒性T细胞作用，另外HA各部分的抗原性和免疫原性也有差别，研究表明，HA1的免疫原性以及抗原性强于HA2。 本研究利用RT-PCR技术扩增和克隆了A／Chicken／Guangdong／1／00(H5N1)亚型禽流感病毒的HA1基因，对HA1基因核苷酸序列和编码的氨基酸序列与基因库中已发表的序列A／Goose／Guangdong／1／96(H5N1)及A／Hongkang／156／97(H5N1)进行比较分析。结果表明同源性分别达到98％和97％，并且在HA1切割位点有多个碱性氨基酸的插入序列，证明其为强毒株。 将HA1基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-2，经酶切鉴定及PCR鉴定，证明成功构建了融合表达载体pGEX-HA1。将构建好的融合表达载体，在1mmol／L的IPTG诱导下，在大肠杆菌BL21中得到大量表达，经过4h表达量既达到高峰。融合蛋白GST-HA1的分子量为62KD，以包涵体形式存在。Western-Blot免疫印记分析，融合蛋白与H5亚型AIV阳性血清发生特异性反应，表明该重组蛋白具有良好的抗原性。 用含有2mol／L和4mol／L尿素的包涵体洗涤液洗涤包涵体，在37℃条件下，洗去了大部分菌体蛋白及其它核酸物质。用8mol／L尿素作为变性剂溶解包涵体，包涵体在8mol／L尿素中的溶解性非常好。用梯度透析法对变性的融合蛋白GST-HA1进行复性，在低蛋白浓度的条件下，获得了很好的复性结果，复性前蛋白浓度为1.02mg／ml，复性后蛋白浓度为0.875mg／ml。分别用亲和层析以及电洗脱两种方法对GST-HA1融合蛋白进行了纯化，都获得了理想的纯化结果。 采用ELISA方法检测纯化后的融合蛋白的抗原性。结果表明，该融合蛋白能同H5亚型阳性血清发生特异性结合，并且同H7、H9亚型AIV阳性血清没有交叉反应。说明该蛋白具有很好的抗原性和特异性。