具生物钟表达特性的Rubisco活化酶和锰稳定蛋白的结构功能研究

来源 :浙江大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:qingsong009
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本文通过cDNA阵列技术(cDNAarray)分离出水稻中具有昼夜节奏和生物钟表达特性的基因,并着重通过多种生化手段对具有生物钟表达特性的光合相关蛋白Rubisco活化酶(RCA)和锰簇稳定蛋白(MSP)结构功能进行了研究。主要包括以下四方面的结果:1.cDNAarray分析水稻中具昼夜节奏及生物钟变化的基因:   我们构建了包含有5837条具3’端Poly(A+)的非冗余的表达序列标签(EST)的水稻cDNA阵列,用它检测一昼夜内不同光照条件下间隔4小时的基因表达谱。 2.水稻叶片Rubisco活化酶表达的昼夜变化:   在48h的自然光照、连续光照和连续黑暗处理下,水稻幼苗RCAmRNA的含量均表现出昼夜节奏特性,其中以自然光周期中变化最为明显,连续光照可以使第一个周期的峰值提前,但连续黑暗和连续光照处理可使第二个周期的峰值明显下降。 3.酪氨酸残基参与维持锰稳定蛋白功能构象的研究:   利用乙酰咪唑(NAI)化学修饰MSP中的酪氨酸残基(Tyr),结果发现8个Tyr依其在MSP空间构象中的位置可区分为暴露于表面,浅层包埋和深度包埋三类。约5(实际5.2)个暴露于表面的Tyr很容易被修饰上,有1-2个浅层包埋的Tyr在较高浓度的NAI条件下可以被修饰,至少还有1个处于深度包埋的Tyr只有在MSP解析叠情况下才能被修饰上。   4.关键赖氨酸残基参与维持锰稳定蛋白功能构象的鉴定:   实验用N-丙酰基琥珀酰亚胺(NSP)对MSP中的Lys进行专一性的修饰,以分析赖氨酸残基(Lys)在MSP结构功能中所起的作用。0.5mMNSP浓度下修饰的MSP能较好的重组到PSII颗粒上,放氧活力也得到恢复。而4mMNSP浓度下修饰的MSP几乎失去重组到PSII颗粒上的能力,PSII颗粒的放氧活力也得不到恢复。
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